多不饱和脂肪酸发酵的代谢调控育种.docx

多不饱和脂肪酸发酵的代谢调控育种杜冰潘力林炜铁姚汝华(华南理工大学食品与生物工程学院,广州,510640)摘要多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacids,PUFAs)对人体健康有重要影响,目前分离纯化主要来自海洋鱼油,但存在许多不利因素限制其生产及应用。研究表明微生物具有大规模工业化生产多不饱和脂肪酸的能力。本文综述了多不饱和脂肪酸产生菌的代谢控制育种思路。关键词多不饱和脂肪酸微生物发酵代谢控制研究有了突破性的发展,发现了属于ω23系列的2种重要多烯脂肪酸DHA、EPA。它们存在于大脑、视网膜及精子中,对中枢神经功能作用巨大5。近10年来,对脂肪酸代谢产物PGs(前列腺素,prostaglandins)和LTs(白三烯,leukotrienes)的研究结果使得多不饱和脂肪酸的代谢及其与生命现象的密切关系被基本阐明。多不饱和脂肪酸已广泛应用于医药、食品、化妆品、饲料等领域。但目前多不饱和脂肪酸的商业来源主要是深海鱼油和某些动植物,由于鱼油资源有限,受气候产地等条件的影响且纯化成本极高6,产品不能满足市场需求。而微生物发酵法生产多不饱和脂肪酸却不受原料的限制,因此,世界各国开展了多不饱和脂肪酸的微生物发酵育种、发酵提取工艺以及发酵动力学等方面的研究。多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacids,PUFAs)是指含2个或2个以上双键且碳原子数为16～22的直链脂肪酸。包括γ2亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等1。根据距脂肪酸中性末端(ω端)的第一个双键位置的不同,多不饱和脂肪酸可以分为n26和n23两大系列。n26系列是由亚油酸衍生而来,主要有γ2亚麻酸、花生四烯酸等。n23系列则是由α2亚麻酸衍生而来,包括DHA、EPA等2。传统上鱼油是多不饱和脂肪酸的主要来源。自30年代发现了亚油酸(18∶2ω26)和亚麻酸(18∶3ω23)之后,提出了必需脂肪酸的概念,认为人的机体不能够合成亚油酸和亚麻酸,必需从食物中获取3。此后,越来越多的研究集中于这2种不饱和脂肪酸上,认为机体的许多重要生理机能与多不饱和脂肪酸有关。1978年Dyerberg的流行病学的研究指出,爱斯基摩人不仅心肌梗塞的发病率低,而且类风湿性关节炎、红斑狼疮等以自身免疫异常为原因的慢性炎性疾患的发病率明显低于当地的白种人。大量食用海鱼和海兽,从中摄取多量的多不饱和脂肪酸无疑是一个重要的原因4。80年代初,脂肪科学的多不饱和脂肪酸的生物合成途径微生物利用葡萄糖合成多不饱和脂肪酸17的代谢途径如图1所示。由图1可以看出多不饱和脂肪酸的生物合成机制比较复杂,从葡萄糖开始至某种多不饱和脂肪酸的合成涉及20多步酶促反应。关于其代谢调控机制,目前尚不十分清楚。代谢调控发酵育种的基本思想823第一作者:博士研究生。国家“九五”科技攻关项目(96-C03-01-04)收稿时间:2000-01-10第26卷第5期杜冰等:多不饱和脂肪酸发酵的代谢调控育种53所谓代谢控制发酵就是利用遗传学的方法或其它生物化学的方法,人为的在DNA的分子水平上,改变和控制微生物的代谢,使有用的目的产物大量生成、积累的发酵。其关键在于能否打破微生物正常的代谢调节,人为的控制微生物的代谢,而微生物细胞中这种调节控制作用主要靠2个因素,即参与调节的有关酶的活性和酶量,也就是反馈抑制和反馈阻遏。有某种基因并不能保证大量产生某种酶。酶的合成还受代谢物(酶反应的底物、产物及其类似物)的调节和控制。当有诱导物存在时,酶的生成量可以几倍乃至几百倍的增加。相反地,某些酶反应的产物,特别是终产物,又能产生阻遏作用,使酶的合成量大大减少。在酶反应过程中,酶的活性受终产物的抑制或激活,尤其是代谢途径中的关键酶,它对于整个生化反应起限速作用。要使微生物大量积累目的产物,就要控制微生物的代谢作用,即减除或削弱微生物细胞自我调节控制机制,具体说来,应从增强目的产物的主代谢流,切断支路代谢,解除菌体自身的反馈调节,增加前体物的合成及去除终产物等几个方面入手。最有效的方法就是造就从遗传角度解除了微生物正常代谢控制的突变株,突破微生物的自我调节控制机制。这可以通过选育具有结构类似物抗性、营养缺陷(或渗漏突变)、分解能力缺陷等遗传标记的突变株,或将某些关键酶基因进行克隆而加以扩增,构建目的工程菌株等来达到。多不饱和脂肪酸产生菌的育种思路33.1γ2亚麻酸、花生四烯酸发酵的代谢控制育种(1)出发菌株的选择γ2亚麻酸或花生四烯酸发酵多采用被孢霉(Mortierella)、毛霉(Mucor)和根霉(Rhi2zopus)等产油脂较多的真菌做出发菌株9。(2)切断或减弱支路代谢通过切断或减弱非γ2亚麻酸生物合成的支路代谢,使更多的磷酸烯醇式丙酮酸、乙酰CoA或亚油酸生成γ2亚麻