cSN５０阻断NF－κB、抑制内毒素、酒精引起的RAW２６４．７细胞凋亡的研究.docVIP

精品论文 参考文献 cSN５０阻断NF－κB、抑制内毒素、酒精引起的RAW２６４．７细胞凋亡的研究 樊耀敏　薛　挥　陈博婷 　　西北大学医院　陕西　西安　７１００６９ 基金项目:陕西省攻关项目(２００７K１４－２). 　　【摘要】　目的:研究酒精、内毒素、酒精和内毒素共刺激引起RAW２６４．７(小鼠单核巨噬细胞)细胞活化的信号传导通路.方法:不同浓度的酒精、内毒素、酒精联合内毒素刺激RAW２６４．７细胞２４h、４８h前后,应用间接免疫荧光法观察NF－kappa;B、Ikappa;Balpha;位置.结果:经酒精、内毒素、酒精联合内毒素刺激后Caspase３活性较空白组升高(P＜０．０５);凋亡率随酒精、内毒素浓度的升高而升高(P＜０．０５).结论:RAW２６４．７细胞经酒精、内毒素、酒精联合内毒素刺激后NF－kappa;B入核,TNF－alpha;分泌升高,细胞凋亡增加.cSN５０抑制RAW２６４．７细胞被刺激后的NF－kappa;B核转位、TNF－alpha;分泌和细胞凋亡. 【关键词】　cSN５０;RAW２６４．７;核因子－kappa;B;细胞凋亡cSN５０blocksNF－kappa;Btranslocation,inhibitionofendotoxin,alcohol－inducedRAW２６４．７cellapoptosis【Abstract】ThepurposeofAlcohol,endotoxins,alcoholandco－stimulationofendotoxinRAW２６４．７(mousemacrophagemonocyte)cellactivationsignaltransductionpathＧways．Alcoholconcentrationofdifferentmethods,endotoxins,alcoholcombinedwithendotoxinstimulateRAW２６４．７cells２４h,around４８h,indirectimmunofluorescenceobＧservedNF－kappa;B,Ikappa;Balpha;position．ResultsAfteralcohol,endotoxin,alcoholcombinedwithinternalLPSCaspase３increasedactivitythanthecontrolgroup(P ＜０．０５);theapoptosisrateincreasedwithalcohol,increasestheconcentrationofendotoxinincreased(P＜０．０５)．ConclusionRAW２６４．７cellstreatedwithalcohol,endotoxin,alcoholcomＧbinedwithinternalafterLPSNF－kappa;Bintothenucleus,TNF－alpha;secretionincreased,increasedapoptosis．cSN５０inhibitionRAW２６４．７cellswerestimulatednucleartranslocaＧtionof【KNeyFw－okappa;rBds,】TNF－alpha;secretionandapoptosis． cSN５０;RAW２６４．７;Nuclearfactor－ kappaB;Cellapoptosis【中图分类号】R３９ 【文献标识码】B 　　【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０５４５－０２??　 　　酒精性肝病在我国有些地方已成为第二大肝病[１].而内毒素LPS诱导的炎症反应、细胞因子及细胞凋亡的作用起关键作用. 材料和方法一、实验材料内毒素(细菌脂多糖)为Sigma公司产品,NF－kappa;BP５０、Ikappa;Balpha;为Santacroz公司多抗,ELISA试剂盒购自深圳晶美生物试剂公司,Caspase３分光光度试剂盒购自南京凯基,cSN５０、CN５０由美国VanderbiltUniversity馈赠. 二、方法１　RAW２６４．７细胞按酒精、内毒素、酒精联合内毒素、酒精＋内毒素＋cSN５０(阳性组)、酒精＋内毒素＋CN５０(阴性对照组)、空白分为六组.２　ELISA　１０００rpm离心收集上清,按照ELISA试剂盒操作说明测定TNF－alpha; 浓度.取测定结果差别较大的三个浓度作后续实验.３　分光光度计　收集对数生长期细胞,用Caspase３试剂盒自带试剂及说明提取蛋白,Bradford法测定其中的蛋白浓度,依据使用说明操作,酶标仪或分光光度计(１００mu;l的比色皿)在lambda;＝４０５nm或４００nm测定其吸光值.４　流式细胞仪　收集经各浓度酒