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gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用
精品论文 参考文献
gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用
湖南中医药高等专科学校附属第一医院 412000
【摘 要】目的:探讨gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用,探索治疗移植静脉再狭窄的方法。方法:选用wistar大鼠40只,按照处理方法的不同,平均分成研究组和对照组。对照组在移植静脉后做空白凝胶处理,研究组则是做重组腺介导gax凝胶涂布处理,观察两组大鼠的mRNA表达、gax蛋白表达情况和平滑肌细胞表型的变化情况。结果:研究组中的mRNA表达和gax蛋白表达指标均有增高,且显著高于对照组;研究组PCNA表达明显减弱且低于对照组;研究组合成表型和过渡型VSMC数量明显减少,而收缩表型VSMC数量明显高于对照组,两组综合比较,差异显著P<0.05。结论:血管内膜过度增生和平滑肌细胞的合成表型有密切的联系,gax基因过表达状态下,其可以明显诱使增殖型平滑肌细胞数量减少,在很大程度上抑制了增殖型平滑肌细胞向内迁移的作用,同时减少了细胞外基质的合成。
【关键词】gax基因;移植静脉;平滑肌细胞增殖;抑制作用
社会的老龄化和人们饮食结构的变化,使得动脉缺血性疾病和冠心病的发病概率每年都在增长。医学技术的发展,采用静脉移植的治疗方式在临床上的使用频率越来越高。采用静脉移植手术其有一定的局限性,即在早期静脉阻塞的概率有5%-26%,在晚期则达40%之高,发生静脉阻塞的因素主要是血管内膜增生和粥样硬化而使血管狭窄[1]。因此,本文对40只wistar大鼠进行研究,探讨gax基因过表达对平滑肌细胞增殖的影响,现将报告整理如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
选用wistar大鼠40只,按照处理方法的不同,平均分成研究组和对照组,各20只。其中,研究组中,雌鼠10只,雄鼠10只,平均体重为(240plusmn;50)g;对照组中,雌鼠9只,雄鼠11只,平均体重为(245plusmn;55)g;所有大鼠均行自体颈内静脉-颈总动脉移植术。两组大鼠的一般资料差异比较P>0.05,存在可比性。
1.2方法
1.2.1治疗方法
对照组在移植静脉后做空白凝胶处理,研究组则是做重组腺介导gax凝胶涂布处理,具体处理方法是:行自体颈内静脉-颈总动脉移植术后,在移植动脉和周围吻合的地方涂抹剂量为2times;1011vmiddot;g/ml的rAVV-Gax和浓度为30%的凝胶[2]。
1.2.2检测方法
免疫组织化学方法:PCNA抗体染色,采用3%双氧水、50mu;l免疫动物血清和50mu;l过氧货物酶阻断液进行15-20分钟的卵育;
蛋白印迹方法:电泳缓冲液由14.1g氨基乙酸和3.01g Tris两者进行水溶。转印液由11.1g氨基乙酸和2.3g Tris两者进行水溶。取100mg的组织加入溶解缓冲液,操作流程是电泳-转印-封闭-1抗孵育-2抗孵育-检测结果[3]。
反转录酶链式反应方法:提取RNA,并对其浓度和纯度进行测定,进行反转录酶链式反应,检测PCR产物。
电镜分析法:采用H-600型透射电镜观察VSMC的超微结构。取移植静脉6块,用浓度为2.5%的戊二醛进行固定,并用不同浓度的酒精逐级脱水之后切成薄片,用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色后观察[4]。
1.3观察指标
观察两组大鼠的mRNA表达、gax蛋白表达情况和平滑肌细胞表型的变化情况。
1.4统计学方法
采用SPSS19.0软件对数据进行统计和分析,用均属差(Xplusmn;S)表示计量资料,若(P<0.05)则差异比较具有统计学意义。
2.结果
2.1两组大鼠mRNA表达和gax蛋白表达指标对比情况
通过反转录酶链式反应方法,研究组中的mRNA表达和gax蛋白表达指标均有增高,且显著高于对照组P<0.05,数据见表1。
表1 两组大鼠移植静脉后mRNA表达和gax蛋白表达指标比较
分组 mRNA表达 gax蛋白表达
研究组 33.76plusmn;13.41 13.71plusmn;3.41
对照组 54.31plusmn;11.47 4.3plusmn;2.21
2.2两组大鼠PCNA指标对比情况
通过免疫组织化学方法,研究组PCNA表达值为(107.1plusmn;37.9)明显减弱且低于对照组的(51.2plusmn;26.2)P<0.05。
2.3两组大鼠VSMC表型的检测结果对比情况
通过电子显微
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