三明市健康人群乙型肝炎病毒患者和丙型肝炎病.docVIP

精品论文 参考文献 三明市健康人群乙型肝炎病毒患者和丙型肝炎病 黄思晓 (福建省三明市第一医院检验科 福建三明 365000) 　　【摘要】 目的 了解三明市健康人群、乙型肝炎病毒（HBV）患者和丙型肝炎病毒（HCV）携带者输血传播病毒（TTV）的感染情况,探讨三明市人群所感染TTV的基因群别分布情况。方法 准备106名健康人群、64名HBV患者和36名HCV携带者的血浆。设计24对序列特异性引物，G1-G5群特异性巢式PCR，分别检测三组血浆中TTV的5 种基因群的DNA。结果 （1）使用群特异性PCR检测TTV，G4群TTV感染率最高，为52.0%，然后依次为G5:39.1%，G3: 32.7%，G1: 25.7%，G2: 8.4%。（2）TTV常常混合感染：检测出2种属于不同群TTV感染的实验标本为数不少（19.8%），有4份标本甚至检测出属于3种不同群TTV－DNA。HBV患者组，检测出2种属于不同群TTV的比率占56.3%，有5个实验对象和2个实验对象分别检测出3重(群)和4重(群) TTV感染。结论： 1-5群的TTV都可以在三个组别中被检测出，HBV组和HCV组各群TTV的感染率比健康人群组高。TTV易发生混合群感染， 　　【关键词】TTV　HBV　HCV　 巢式PCR 　基因序列 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）35-0047-01 　　目前TTV的检测方法主要依靠巢式PCR，因为TTV在血浆中滴度是很低的，巢式PCR可以提高其检测的特异性和灵敏度。但由于TTV的变异程度比较高，因此PCR检测时对引物选择是非常重要的。日本学者最早根据CloneN22基因序列设计引物，进行巢式PCR扩增，检测TTV-DNA，结果发现该套引物检出率低。后来其他研究者发现在TTV非转录区（UTR）存在一些高度保守序列[1]，根据这部分序列所设计的引物检测TTV-DNA，敏感性明显提高。但由于TTV不同群之间的变异程度相当大，因此设计不同的引物对TTV不同基因群别进行分群检测也是非常必要的。 　　1 材料与方法 　　1.1标本来源：随机选取在三明第一医院体检科抽血健康人106名和随机选取三明市第一医院住院的HBV患者64名和门诊就诊的HCV携带者32名。 　　1.2 DNA的抽提　采用高纯度病毒核酸提取试剂盒参照说明进行。 　　1.3 引物的设计 参照GenBank 中发表的各群TTV全部??因序列，进行核苷酸序列比对，合理设计出1－5群TTV引物。各套PCR体系引物的位置序列、极性和产物大小见表(1) 　　　　 　　1.4 PCR反应条件和PCR 反应产物的检测1-5群TTV的检测采用巢式PCR（其中G4采用半巢式PCR）。各反应体系和反应条件有所不同，将1-5群巢式PCR的反应体系PCR 扩增体系和循环参数以及PCR 反应产物的检测按文献[2]。 　　2 结果 　　各组TTV 1-5各群感染率，在 TTV各群总感染率中，G4群TTV感染率最高，为52.0%（105/202），然后依次为G5: 39.1% (79/202)，G3: 32.7%66/202(66/202)，G1: 25.7% (52/202)，G2: 8.4% (17/202)。三个组群TTV感染率高低和总感染率的高低排序是相同的。从三个组1-5群TTV平均感染率的比较上看，HBV患者和HCV携带者TTV各群平均感染率（45.0%和37.8%）比健康人群（23.8%）高(x2=27.32，plt;0.01，x2=18.52，plt;0.01)。HBV组TTV各群平均感染率和HCV组各群平均感染率相比较没有显著区别（x2=2.29，pgt;0.05）。 　 　 如实验所示，TTV常常混合感染。测出2种属于不同群TTV感染实验者也有不少（19.8%），4份标本甚至检测出了属于3种不同群TTV－DNA。HBV患者组中，检测出1种TTV-DNA 和2种属于不同群TTV-DNA，分别占29.7%和56.3%，5份标本和2份标本检测出3重(群)和4重(群) TTV的感染。HCV携带者组中，检测出1种TTV-DNA和2种属于不同群TTV-DNA，分别占28.1%和31.2%，9份标本和4份标本可以检测出3重(群)和4重(群) TTV的感染。 　　3 讨论 　　不同TTV分离株的基因序列变异性很强，相互之间差异性可高达到40%。根据相互之间基因序列差异度，TTV被分为五个基因群。本研究设计五种基因群的不同引物，用巢式（半巢式）PCR方法扩增TTV-DNA。第一轮PC