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上尿路结石患者血清纳米细菌感染及其临床意义
精品论文 参考文献
上尿路结石患者血清纳米细菌感染及其临床意义
1.新疆石河子市人民医院检验科 石河子 832000
2新疆石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科 石河子 832000
【摘 要】目的:探讨上尿路结石患者血清纳米细菌的感染情况。方法:选取上尿路结石患者35例,正常对照者35例,无菌技术抽取静脉血5ml,离心,取上清液,行纳米细菌培养,以生理盐水替代血清重复上述操作作为阴性对照,每周于倒置显微镜下观察其生长情况并记录。结果:结石组有29例(82.9%)4周后在培养瓶壁上出现数目不等的白色结晶,直径为0.15-0.25 mm,培养至8周,白色结晶体积增大,肉眼清晰可见白色沉淀,沉淀表面凹凸不平,直径为11-15mm,对照组8例阳性(22.9%)阳性,P=0.000,差异有显著统计学意义。结论:纳米细菌与泌尿系结石关系密切,可能是导致泌尿系结石的原因之一。
【关键词】纳米细菌;上尿路结石;细菌培养;血清
前言
泌尿系结石是一种全球性疾病,其病因复杂,有多种学说解释其发生机制,多年来,我们一直致力于泌尿系结石的研究[1,2,3,4],分别从环境、膳食、代谢、遗传易感性等几个方面对泌尿系结石的病因进行了阐述,但仍不够明了。近年来,对纳米细菌的研究,为泌尿系结石发病机制的阐明提供了新的切入点[5,6,7]。为此,我们收集肾结石患者35例,对其血清进行纳米细菌培养,报道如下:
1 资料与方法
1.1 临床资料
选取上尿路结石患者35例,健康对照者35例,留取中段晨尿;结石患者的选择:静脉肾盂造影、CTU或MRI证实为单侧泌尿系结石,且无泌尿系畸形:如肾盂输尿管交界处狭窄、输尿管狭窄等,并行血、尿检查,排除代谢异常者。
1.2 方法
1.2.1纳米细菌培养
将无菌静脉血离心(1500r/min离心5min),取上清液通过一次性输液器滤膜过滤2次后,之后依次经0.45mu;m和0.22mu;m一次性正压滤器过滤,再将滤液0.1 mL加入含DMEM培养液、10%gamma;-FBS和1%HEPES缓冲液的培养瓶中,37℃、5%CO2条件下进行培养。以0.9%氯化钠注射用代替尿液标本重复上述操作作为阴性对照。每周于倒置显微镜下观察培养情况并记录。
1.2.2 茜素红钙染色
将??本培养菌液滴至载玻片上,自然晾干,用95%乙醇和乙醚固定15min,无菌水洗后放置70℃ 烤箱中烘烤10 min,用无菌蒸馏水冲洗3遍,每遍2min,用2%茜素红钙染液染5min,0.2%淡绿水溶液复染30s,0.5%醋酸水溶液速洗,最后用95%乙醇和100%乙醇脱水,待烘干后用二甲苯透明中性树胶封固,油镜观察。
1.2.3 应用透射电镜(负染法)
吸取含纳米细菌的培养液,16 000rpm离心45min,弃上清液,用PBS洗涤沉淀,2.5%戊二醛4℃固定24h,双蒸水洗涤5mintimes;3次,离心后加入0.5mL双蒸水制成混悬液。将附有碳支持膜的200目铜网浮于上述悬液的液滴上5min,用滤纸小心吸除液体,置于10mL/L磷钨酸悬液的液滴上90s,用滤纸小心吸除液体、晾干,在H-7650透射电镜下观察,工作电压80kV。
1.2.4结石成分分析
①取结石样本约l-1.5mg,样本载体溴化钾200-300mg,分别将其烘干;②样品制备:压片前分别取出拱干的溴化钾和结石样品,将其放入玛瑙研钵充分研磨后,置入100℃的烘箱内。烘干5分钟左右,取出继续研磨约30秒,放置于压片机压片30秒制成压片;③压片装入结石红外光谱自动分析仪中,分析仪自动打印报告和分析结果。
1.3 统计学处理
采用 SPSS17.0 软件,计量资料采用 xplusmn;S表示,计量资料先进行Levene方差齐性检验,若方差具有齐性(P gt; 0.05),采用两独立样本 t 检验,若方差不具有齐性(P lt;0.05),则采用Satterthwaite近似 t 检验及非参数检验,计数资料采用 chi;2 检验,以 P lt;0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 纳米细菌培养
纳米细菌在 37℃ 和 5% CO 2 的细胞培养条件下,经过4-6周的培养,在倒置显微镜下可见细微颗粒,积聚成团状或分散,并逐渐贴附于培养瓶底部(见图1)。同时,生理盐水代替原尿样本培养作为阴性对照,对照培养液均未发现纳米细菌。
2.2 纳米细菌茜素红钙染色
普通光镜下观察,纳米细菌的矿化外壳被茜素红染剂染成红色,视野中可见分散或聚集的红色颗粒(图2)。
2.4 结石组、对照组血液纳米细菌感染情况
35份肾结石患者
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