上尿路结石患者血清纳米细菌感染及其临床意义.docVIP

精品论文 参考文献 上尿路结石患者血清纳米细菌感染及其临床意义 1.新疆石河子市人民医院检验科 石河子 832000 2新疆石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科 石河子 832000 【摘 要】目的：探讨上尿路结石患者血清纳米细菌的感染情况。方法：选取上尿路结石患者35例，正常对照者35例，无菌技术抽取静脉血5ml，离心，取上清液，行纳米细菌培养，以生理盐水替代血清重复上述操作作为阴性对照，每周于倒置显微镜下观察其生长情况并记录。结果：结石组有29例（82.9%）4周后在培养瓶壁上出现数目不等的白色结晶，直径为0.15-0.25 mm，培养至8周，白色结晶体积增大，肉眼清晰可见白色沉淀，沉淀表面凹凸不平，直径为11-15mm，对照组8例阳性（22.9%）阳性，P=0.000，差异有显著统计学意义。结论：纳米细菌与泌尿系结石关系密切，可能是导致泌尿系结石的原因之一。 【关键词】纳米细菌；上尿路结石；细菌培养；血清 前言 泌尿系结石是一种全球性疾病，其病因复杂，有多种学说解释其发生机制，多年来，我们一直致力于泌尿系结石的研究[1，2，3，4]，分别从环境、膳食、代谢、遗传易感性等几个方面对泌尿系结石的病因进行了阐述，但仍不够明了。近年来，对纳米细菌的研究，为泌尿系结石发病机制的阐明提供了新的切入点[5，6，7]。为此，我们收集肾结石患者35例，对其血清进行纳米细菌培养，报道如下： 1 资料与方法 1.1 临床资料 选取上尿路结石患者35例，健康对照者35例，留取中段晨尿；结石患者的选择：静脉肾盂造影、CTU或MRI证实为单侧泌尿系结石，且无泌尿系畸形：如肾盂输尿管交界处狭窄、输尿管狭窄等，并行血、尿检查，排除代谢异常者。 1.2 方法 1.2.1纳米细菌培养 将无菌静脉血离心（1500r/min离心5min），取上清液通过一次性输液器滤膜过滤2次后，之后依次经0.45mu;m和0.22mu;m一次性正压滤器过滤，再将滤液0.1 mL加入含DMEM培养液、10%gamma;-FBS和1%HEPES缓冲液的培养瓶中，37℃、5%CO2条件下进行培养。以0.9%氯化钠注射用代替尿液标本重复上述操作作为阴性对照。每周于倒置显微镜下观察培养情况并记录。 1.2.2 茜素红钙染色 将??本培养菌液滴至载玻片上，自然晾干，用95%乙醇和乙醚固定15min，无菌水洗后放置70℃ 烤箱中烘烤10 min，用无菌蒸馏水冲洗3遍，每遍2min，用2%茜素红钙染液染5min，0.2%淡绿水溶液复染30s，0.5%醋酸水溶液速洗，最后用95%乙醇和100%乙醇脱水，待烘干后用二甲苯透明中性树胶封固，油镜观察。 1.2.3 应用透射电镜（负染法） 吸取含纳米细菌的培养液，16 000rpm离心45min，弃上清液，用PBS洗涤沉淀，2.5%戊二醛4℃固定24h，双蒸水洗涤5mintimes;3次，离心后加入0.5mL双蒸水制成混悬液。将附有碳支持膜的200目铜网浮于上述悬液的液滴上5min，用滤纸小心吸除液体，置于10mL/L磷钨酸悬液的液滴上90s，用滤纸小心吸除液体、晾干，在H-7650透射电镜下观察，工作电压80kV。 1.2.4结石成分分析 ①取结石样本约l-1.5mg，样本载体溴化钾200-300mg，分别将其烘干；②样品制备：压片前分别取出拱干的溴化钾和结石样品，将其放入玛瑙研钵充分研磨后，置入100℃的烘箱内。烘干5分钟左右，取出继续研磨约30秒，放置于压片机压片30秒制成压片；③压片装入结石红外光谱自动分析仪中，分析仪自动打印报告和分析结果。 1.3 统计学处理 采用 SPSS17.0 软件，计量资料采用 xplusmn;S表示，计量资料先进行Levene方差齐性检验，若方差具有齐性（P gt; 0.05），采用两独立样本 t 检验，若方差不具有齐性（P lt;0.05），则采用Satterthwaite近似 t 检验及非参数检验，计数资料采用 chi;2 检验，以 P lt;0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 纳米细菌培养 纳米细菌在 37℃ 和 5% CO 2 的细胞培养条件下，经过4-6周的培养，在倒置显微镜下可见细微颗粒，积聚成团状或分散，并逐渐贴附于培养瓶底部（见图1）。同时，生理盐水代替原尿样本培养作为阴性对照，对照培养液均未发现纳米细菌。 2.2 纳米细菌茜素红钙染色 普通光镜下观察，纳米细菌的矿化外壳被茜素红染剂染成红色，视野中可见分散或聚集的红色颗粒（图2）。 2.4 结石组、对照组血液纳米细菌感染情况 35份肾结石患者