低能N离子注入诱变的凤仙花突变体组织培养及其诱变机制分析研究.pdfVIP

低能N离子注入诱变的凤仙花突变体组织培养及其诱变机制分析研究.pdf

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SWITHLOWr—ENERGY TISSUECUIJUI之E IMPLAN仉气TIONON办彳只4刀E嬲 N+ION 0N BALSAMINEL.入I图D入N删SIS MUTANTS MECHANISMOFINDUCED ADissertationSubmittedto HenanNormal theGraduateSchoolof University in Fulfillmentofthe Partial Requirements forthe ofMasterofScience Degree By X/eLU un Wuj Supervisor:Prof.Gao 1 May,201 ㈨IIII I III II II IIII IIIII f Y1960727 摘要 balsamineL.)属凤仙花科凤仙花属,是我国各地广泛分布的一 风仙花(Impatiens 种多年生常绿草本花卉。常见凤仙花多为单色,单瓣较多,重瓣花型简单,且花多为叶 腋处着生,大大限制了凤仙花作为常规观赏花卉的充分开发利用。离子注入作为一种诱 变技术已经在多种园艺植物的性状改良上获得了成功,通过合适剂量的低能N+离子注 入凤仙花的不同器官,可在诱变的后代中选育出更为符合需要的新品系。。但是对于低能 离子诱变的风仙花的快速组织培养及快繁体系的建立以及突变机制的分析鲜见报道。本 项目以低能盯离子束诱导获得了稳定的粉色和红色风仙花突变体为材料,利用组织培 养技术初步建立了凤仙花突变体体细胞快繁体系。同时采用ISSR、RAPD分子标记技术 对风仙花的突变体和对照株的核基因组DNA标记进行扩增并克隆测序,并分析揭示低 能旷离子注入引起的凤仙花基因组变异机制。研究取得的主要结论如下: 1、初步建立了凤仙花组织培养技术体系。确定了下胚轴诱导愈伤组织形成及继代 2.5 2.0 的培养基为:MS+6.BAme,/L+NAAmg/L+3%蔗糖+O.5%琼脂;愈伤组织分化芽 MS+6.BA0.2 0.05 的培养基为:1/2 me,/L+NAAmg/L;愈伤组织分化根的培养基为:MS+ NAA0.5 mg/L+2.5%蔗糖+0.5%琼脂;经炼苗后移栽,初步获得了快繁幼苗。 2、建立了凤仙花的ISSR反应体系,并将突变体和对照植株基因组进行了ISSR扩增, 将获得的特异条带进行了克隆和测序分析。结果发现,从121条ISSR弓I物中筛选出了6 条可以稳定扩增出特异条带的引物,引物多态性为4.96%,共扩增出46条特异带,其中 红色突变体有18条,粉色突变体有28条。在克隆的红色凤仙花的ISSR条带中,共有55 个位点发生了碱基突变;在克隆的粉色凤仙花的ISSR条带中,共有71个位点发生了碱基 突变。对特异条带进行了克隆和测序,序列分析发现:红色诱变和粉色诱变的碱基变异 的类型均包括碱基的转换、颠换、缺失、插入四种。在红色突变体

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