应用RPHPLC分析重组干扰素制品中微量蛋白含量研究.pdfVIP

农之代、分 .应用RP-HPLC分析重组干扰素制品中微量蛋白含量 中国药品生物制品检定所生化室 饶春明 林春梅 王军志 摘妥 应用WatersAllianceHPLC系统分析重组人干扰素 to次重复进样 千扰素的RP-HLAC保留时间，峰高和峰面积的RSD分别为0.1%,0.4%,0.9%. 在特定条件下可将成品中千扰素和其他光吸收物质完全分离，检测灵敏度达到 0.5ug.干扰素进样圣在。.5-2.Oug范围内符合直线方程式，相关系数大于。.998, 测定误差小于2%，可用于重组干扰素成品中微量蛋白含量的测定. 重组人千扰素 (rh1FN)比活性高 (”，在成品中含量极低，通常以微克显 蛋白分装。为了避免微量rhIFN的吸附损失和保证rhIFN生物学活性的稳定， 干扰素成品通常都加入毫克量的人血白蛋白作为载体蛋白和稳定剂，因此不能 用Lowry法等测定项目(2)。而国外rhIFN成品多数有蛋白含量测定，随着进 口制品的增加，有必要建立一套误差小，灵敏度高，从复性好的成品微量蛋白 含量测定方法 ，以保证对进 口产 品的质量控制，同时也为我国重组千扰素质量 的提高打下基础。 一、材料和方法: 1.材料 rhIVNa2a标准品由罗氏公司提供，rhIFNa2b标准品由先令葆雅公司提供: 罗扰素，干扰能和 rhIFNa2b水针剂分别为罗氏公司，先令葆雅公司和安微安 科生物高技术有限责任公司检品;三氟乙酸 (T队)为 Sigma公司产品，乙晴 (Ace)为FisherScientific公司产品，HPLC系统测试标准物质为Waters公司 产 品。 2。仪器和设备 AllianceHPLC系统 (包括Waters2690HPLC, Waters996光电二极管矩阵 检测器，Millennium32色谱分析软件)和WatersSymmetryCIS柱 (5um,3.9X 150mm)为 Waters公司产品;BakerbondC18柱 (Wide-pore,300A,5um)为 J.T.Baker公司产品。 3.方法 色谱条件 (1):流动相A0:.I%TFA/Water,流动相 B:0.1%TFA/Ace;流速; 1ml/min。洗脱梯度见表 la 表1 色谱条件 (1)洗脱梯度 l A (% ) B ( 2 C 2 s [_ 70 勺 2 5 2 ‘ 色谱 条件 (2):流动相 A:TFA/Ace/Water=0.2/30/70 流动相 B TFA/Ace/Water==0.2/80/20:流速 :0.9m1/mina洗 脱 务件 贝裹 2。 表 2 色谱条件 (2)洗脱梯度 时间 (min) 人 (%) B (%) 0 77 23 45 63 37 55 49 51 60 10 90 6.5 10