应用基因组改组技术选育真菌α淀粉酶高产菌株研究.pdfVIP

摘要 摘要 以实验室保藏的米曲霉FS一16为原始出发菌株，通过传统诱变方法构建正突变 库。通过致死曲线的测定，确定紫外诱变照射剂量为160s，微波诱变辐射剂量为25s。 出发菌株分别经紫外诱变、微波诱变，采用淀粉平板透明圈初筛、液体发酵复筛， 最终从2000多个突变株中筛选到Q一淀粉酶产量较高稳定性较好的突变株FU一8、 FU一26、FW一11l及FW-130。 通过单因素实验获得米曲霉原生质体制备和再生的最佳条件：菌龄15h，酶解 温度28℃、裂解时间2．5h、0．6mol／L NaCl NaCl作为渗透压稳定剂，含0．6mol／L 的PDA培养基为再生培养基。通过响应面分析法对破壁酶系统进行研究，获得最佳 酶系组成为：蜗牛酶O．8％、纤维素酶0．8％、溶菌酶0．5％。 通过米曲霉原生质体灭活实验得出，用紫外线处理180S或热处理12min，米曲 霉原生质体即可达到100％灭活：原生质体融合条件研究表明最适融合条件为： 经过三轮递推式融合后筛选得到一株能够稳定遗传的改组菌株F3-542，其酶活较原 始菌株提高了61．5％，发酵周期也相对缩短了24h，达到了选育高产菌株的目的。 对改组菌株F3—542的发酵条件进行优化，首先通过单因素实验可知最佳碳源为 玉米粉，最佳有机氮源为牛肉膏，最佳无机氮源为硝酸钠。最适培养条件为：初始 基配方进行进一步优化，获得它们的最佳组合(g／L)：玉米粉56，牛肉膏26，NaN03 4．5，K2HP04 1．5，FeS040．005。整体优化后，改组菌F3．542从最初酶 1．4，MgS04 活力为3920U／mL提高至5147．5U／mL，比最初酶活力提高了31．3％。 关键词：Q．淀粉酶，米曲霉，诱变，基因组改组，发酵优化 1 』 ‘＼ l-· 二二……“●l-J¨¨¨¨-¨-¨-¨--f ●■■■■-●●■■■■■-■__■____■■__●__■■■●■■_●■_●■o_●_●■■●■●●●■l■■_●●_■‘●■●_I●-■●■■●■■●■_____l_________●一 ——．_———一㈣焖 Abstract strain FS一16 inour wastreated OriginalAspergillusoryzae preservedlaboratory as withultravioletandmicrowavesradiation．Themutationconditionswerefollows，UV