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小麦淀粉分支酶基因SBE-Ⅱb植物表达载体的构建及表达鉴定.pdf
江西农业大学学报2013，35(3)：620—625 http：／／xuebao．jxau．edu．cn
Acta Universitatis
Agricuhurae Jiangxiensis
b植物
小麦淀粉分支酶基因SBE-lI
表达载体的构建及表达鉴定
王自布1，齐军仓“，李卫华2，曹连莆2，石培春2
(1．贵州省生物资源开发利用特色重点实验室，贵州贵阳550018；2．石河子大学农学院，新疆石河子832003)
aestivum
摘要：从花后15d的小麦(niticumL．)胚乳中提取RNA，根据GeneBank上已经公布的小麦淀粉分支
511
酶基因(SBE—IIb)序列(AY740401．1)设计引物，经RT．PCR扩增得到一条2bp的条带，测序结果与公布的
序列一致。将克隆得到的基因构建到了植物表达载体pPZP35S上，通过农杆菌叶盘转化法转化烟草叶片，经卡
那霉素筛选、PCR扩增鉴定证明，SBE一11b基因已成功转入烟草细胞中，获得4个转基因株系。转基因烟草叶
片与野生型比较，颜色变暗，植株较小。RT．PCR半定量和实时荧光定量RT．PCR分析表明，转基因烟草株系的
叶片中有SBE．11b基因的表达，与对照植株相比，转SBE-11b基因的植株中的转录本达到了显著性的变化，但
是其淀粉分支酶活性没有达到显著性变化。
关键词：小麦；转基因；实时荧光定量(qRT—PCR)；淀粉分支酶基因(SBE—IIb)
中图分类号：$512．032文献标志码：A 文章编号：1000—2286(2013)03—0620一06
ConstructionofPlantTransformationVectorofWheatStarch
Its Identification
SBE—lI易and
BranchingEnzyme Expression
WANG Pei．chun2
Zi．bul，QIJun—can92+，LIWei—hua2，CAOLian．pu2，SHI
ofthe andutilizationof resourcesofGuizhou
Laboratory biological Province，Guiy—
(1．Key development
55001 of
ang 8，China；2．CollegeAgronomy，ShiheziUniversity，Shihezi832003，China)
totalRNAwasisolatedfrom aestivum 15 after
Abstract：ne wheat(TdtwunL．)endospermdays polli—
nation．One of251 1 ofSBEIIb was transcribedand fromitsmRNA
fragment bp gene reversely amplified using
totheknownSBEIIb the
GeneBank，and
primerpairsdesignedaccording genesequences(AY740401．1
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