基因工程一轮复习公开课.ppt

1．1、1.2　DNA重组技术的基本工具　  基因工程的基本操作程序 （一轮复习课） 2011、1、7 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 为什么基因工程能够成功呢？ 基因拼接的理论基础： 规则的双螺旋结构 基本单位都是脱氧核苷酸 遵循碱基互补配对原则 外源基因在受体内表达的理论基础： 生物界共用一套遗传密码 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 限制酶所识别的序列有什么特点 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制性内切酶 限制酶在原核生物中的作用 限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别序列 基因的载体——“分子运输车” 质粒 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害 PCR技术 DNA复制 不同点 解旋 方式 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 场所 体外复制 主要在细胞核内 酶 热稳定的DNA聚合酶(Taq酶) 细胞内含有的DNA聚合酶 结果 在短时间内形成大量的DNA片段 形成整个DNA分子 二、基因表达载体的构建——核心 （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用___________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 1.过程: 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1.过程: * * (1)基因工程的诞生（A级要求） (2)基因工程的原理和技术(A级要求） (3)基因工程的应用(B级要求） (4)蛋白质工程(A级要求） 考纲要求： 人类需要的基因产物 结果 剪切→拼接→导入→表达 基本过程 DNA分子水平 操作水平 基因 操作对象 生物体外 操作环境 基因拼接技术或DNA重组技术 基因工程的别名 优点：定向改造生物体的性状（目的性强） 育种周期短，克服远缘杂交不亲和障碍 原理：基因重组 分布：主要在原核生物中 作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点 切点：磷酸二酯键 举例：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开（黏性末端） SmaI限制酶能识别GGGCCC序列，并在G和C之间切开（平末端） EcoRI限制酶 DNA连接酶 常用的DNA连接酶： DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 作用实质 都是催化两个脱氧核苷酸 之间形成磷酸二酯键 是否需模板 不需要 需要 连接DNA链 双链 单链 DNA连接酶 DNA聚合酶 作用过程 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个脱氧核苷酸加到已存在的核酸片段的3′端的羟基上，形成磷酸二酯键 作用结果 将存在的DNA片段连接成重组DNA分子 合成新的DNA分子 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 要对天然质粒进行人工改造 作为载体必须具备哪些条件？ 原核细胞的基因结构(补充内容） 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游有启动子，下游有终止子 启动子 真核细胞的