化学发光、时间分辨和酶免三种方法学测定HBsAg.doc

精品论文 参考文献 化学发光、时间分辨和酶免三种方法学测定HBsAg 曾嫚妮1 陈浩全2 （1广西玉林市第一人民医院检验科 广西玉林 537000；2广西玉林市骨科医院检验科 广西玉林 537000） 【中图分类号】R575 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）17-0173-02 【摘要】 目的 酶联免疫化学发光法、时间分辨荧光免疫法和酶联免疫吸附试验法，探讨这三种方法用于检测乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义。方法 采用酶联免疫化学发光法（CLIA）、时间分辨荧光免疫法(TRFIA) 和酶联免疫吸附试验( ELISA) 同时对 655例患者 HBV 血清标本进行 HBsAg检测。结果 CLIA法检测患者标本乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg阳性率分别为16.64%，TRFIA阳性率分别为16.48%。结论 化学发光法测定乙肝病毒血清标志物的相对灵敏度高、特异性好，且为定量检测，可为临床用药疗效观察及乙肝病毒感染的转归提供科学依据。 【关键词】HBV 化学发光法 时间分辨荧光免疫法 酶联免疫吸附试验 1 资料与方法 HBV感染呈世界性流行，但不同地区HBV感染的流行强度差异很大。据报道，全球约3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有100万人死于HBV感染所导致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)。检测乙肝感染和机体免疫状态的常见指标为乙肝表面抗原（HBsAg）、表面抗体（抗-HBs）、e抗原（HBeAg）、e抗体（抗-HBe）和核心抗体（抗-HBc），即通常所说的“两对半”。表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒的膜蛋白，是乙肝病毒感染最直接、最重要的标志物，随着研究的深入和新的抗病毒药物的问世，灵敏度高且又可以进行定量检测的化学发光定量检测试剂盒，满足了检测要求。 1.1 一般资料 选取我院 2011年10～12月门诊患者共 655 例。乙型肝炎诊断参照 2000年中华医学会传染病与寄生虫学会，肝病学分会联全修订的《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型肝炎诊断标准[1]。分别取其静脉血5ml并分离血清后，于-20℃保存待测。 1.2 仪器与试剂 CLIA法使用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的，LUMO化学发光检测仪及配套试剂检测HBV-M定量； TRFIA 法使用上海新波生产的 Anytest2000 型时间分辨荧光免疫检测仪及配套试剂；ELISA法使用上海科华生物药业技术有限公司提供的试剂，应用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的PHOMO酶标仪检测 HBV-M定性。 1.3 检测方法 同时采用CLIA和TRFIA严格按照操作说明对 655 份标本的 HBV-M进行检测。CLIA设定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)ge;0.15ng/ml。TRFIA和ELISA法阳性判定标准按说明书和作业指导书的规定进行。 1.4 统计学处理 应用 SPSS 17.0统计软件进行分析，CLIA和TRFIA不同组别计数资料比较，采用配对计数资料chi;2检验法，以Plt;0.05为有统计学意义。 虽然统计学计算显示无显著差异，但通过五项标志物的模式分析，仍需要用ELISA测定不符标本。 2 结果 CLIA法检测患者标本HBsAg阳性率分别为16.64%。TRFIA法检测患者标本HBsAg阳性率分别为16.48%。x2值通过校正为0，Pgt;0.05，显示两组数据无显著差异，详见表1。 表1 CLIA 合计+ - HBsAg + 106 2 108 TRFIA - 3 544 547 合计 109 546 655 x2 0 P gt;0.05 结果显示 TRFIA 法检测的HBsAg阳性率略高于 CLIA 法，但通过模式分析，TRFIA都为少见或罕见模式，使用ELISA两步法测定TRFIA与CLIA不符的标本。ELISA结果与CLIA一致。 详见表2： 表2 CLIA、TRFIA、ELISA三种方法学测定不符血清 浓度值 模式 OD值 TRFIA CLIA TRFIA CLIA ELISA S/CO 1# 0.15 0.22 4.5 1.4.5 0.351 3.05 2# 0.19 8.96 4.5 1.4.5 3.122 27.14 3# 0.66 0.03 1.2.4.5 2.4.5 0.011 0.09 4# 0.821 0 单1 单5 0.015 0.13