法医学--法医DNA分型.ppt

第18章 法医DNA分型 法医物证学 基本概念： 对涉及法律问题的生物性检材进行检验，解决 个人识别和亲权鉴定问题的法医学分支学科 基本任务： 个人识别--揭示个体身份 亲权鉴定--判定备检者之间是否存在生物学亲缘关系 一、基本概念： 1.基因(gene)：染色体上一段特定的DNA片段。 2.基因座/位点(locus)：基因在染色体上的特定位置。 3.等位基因(allele): 一个基因座上的基因存有DNA一级结构差异。 4.基因型(genetype)：基因座上成对等位基因的组合。 5.表型(phenotype)：通过一定手段观察到的个体性状。 法医常用遗传标记 遗传标记的检测方法： 血清学方法 检验红细胞血型、白细胞血型、红细胞酶型、血清型 DNA检验技术 RFLP技术、 PCR技术 二、DNA水平的遗传标记 核酸分子杂交(hybridization) 根据核酸分子变性及复性的性质，通过碱基配对使不同来源的两条多核苷酸链相互结合。 2、DNA多态性 等位基因（或DNA片段）存在两种以上形式，且每种等位基因频率0.01，本质为碱基构成发生改变（点突变、缺失、插入或置换），分为长度多态性和序列多态性。 DNA长度多态性 由同一基因座上各等位基因之间DNA片段长度差异构成的多态性。 DNA序列多态性 基因组DNA核苷酸序列在个体排列上存在巨大差异，这种差异形成DNA片段序列多态性。 单核苷酸多态性（SNP） 人类基因组范围内，如果任何单碱基突变使特定核苷酸位置上出现两种碱基，其中最少的一种在群体中的频率不少于1% 小卫星DNA： 一类由10-100bp长度重复单位形成的卫星DNA，序列总长度100-20kb，又称可变数目串联重复序列（VNTR）形成机制主要是不等交换 微卫星DNA： 一类由2-6bp长度重复单位形成的卫星DNA，串联重复10-60次 ，总长度多小于300bp，又称短串联重复序列（STR），形成机制主要为复制滑脱 线粒体基因组（mtDNA） 3、DNA多态性检测技术 RFLP试验流程图 DNA纹印： RFLP分析杂交时使用单基因座探针，高度严格杂交条件下，仅与一个小卫星基因座等位片段杂交，形成单基因座RFLP图谱。 DNA指纹： RFLP分析杂交时，使用多基因座探针，不严格杂交条件下，与多个小卫星基因座等位片段杂交，形成多基因座RFLP图谱。 扩增片段长度多态性分析（amp-FLP）： 采用PCR扩增VNTR或STR基因座等位基因进行DNA长度多态性分析的方法。 聚合酶链式反应(PCR) 原理：模拟天然DNA复制的体外DNA扩增方法。以基因组DNA为模板,以一对寡核苷酸为引物,dNTP为原料, 在耐热多聚酶存在下，反复经过变性、退火、引物延伸三个步骤,使靶DNA片段得到复制。 PCR技术用于法医学的特点 1.高灵敏度，适于陈旧、降解、腐败检材； 2.特异性高； 3.可复合扩增； 4.种属特异性； 5.实验周期短，设备条件和操作相对简单。 短串联重复序列（STR）： 广泛存在于人类基因组中的一类具有长度多态性的DNA序列，基序为2-6bp，串联重复10-60次 ，总长度多小于300bp，形成机制主要为复制滑脱。 STR基因座命名原则： 编码区，依据所在基因名称命名 非编码区，依据首次进入公共数据库的序号命名 STR基因等位基因命名原则： 等位基因根据所含重复单位数目命名等位基因。 含有不完整基序的等位基因命名：在完整等位基因数后面加一小数点，小数点后面为不完整序列含有的碱基数。 应用于法医的STR应满足以下条件 PCR扩增产物长度在300bp以下 宜选择四核苷酸STR基因座 选多个STR基因座应不在同一条染色体上 每个STR基因座等位基因数8-10个左右 基因频率分布均匀，没有高或低频基因出现 杂合度高，最好大于0.80； 低突变率0.2%。 多基因座复合扩增（multiplex amplification ） 在一个PCR体系中同时扩增多个基因座 如果同时检测8～16个STR基因座，鉴别能力能够达到DNA指纹的水平。 优点：高效、经济、快速。 目前常用的复合扩增方法有两种： 银染系统、多色荧光自动检测系统 荧光标记的自动检测系统 常采用复合扩增即在同一反应管中同时扩增多个STR基因座，自动化的激光荧光检测系统进行PCR产物分型 原理：荧光染料标记在一条PCR引物的5′端，在PCR扩增时，PCR产物带上荧光标记。电泳时，标记有荧光染料的DNA片段由激光诱发荧光而被检测。 法医遗传学应用STR的特点在于： 高灵敏