猪肺血管紧张素转化酶的提取与纯化.pdfVIP

南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture ISSN2095—1191；CODENNNXAAB http：／／www．nfnyxb．cn DOI：10．3969／j：issn．2095-1191．2014．4．639 猪肺血管紧张素转化酶的提取与纯化 周利琴，廖丹葵 ，孙建华，伍善广，兰雄雕，周敬豪，徐存华 (广西大学 化学4k5-~学院，南宁 530004) 摘要：【El的】研究猪肺血管紧张素转化酶(ACE)的提纯方法，为其生产利用提供技术支撑。【方法】以新鲜猪肺组 织为试验材料，匀浆离心后经硫酸铵分级沉淀透析，然后采用离子交换一超滤离心联合法对猪肺ACE粗提物进行纯 化，测定ACE的分子量、酶活力、纯化倍数及酶活力回收率。 【结果】通过离子交换一超滤离心联合法分离纯化猪肺 ACE，可得到相对分子量182kDa、酶比活力1．2476U／mg的电泳级纯品ACE，其纯化倍数达357．31倍 ，酶活力回收率达 12．28％。ACE,~化反应动力学米氏常数(K)为0．849mmol／L，最大反应速率(V )为9．775nmolm／in。【结论】采用离子 交换一超滤离心联合法纯化猪J]diACEfi~够极大缩短分离与纯化时间，且获得较高的纯化倍数和酶活力回收率，是猪 肺ACE的高效纯化方法。 关键词：血管紧张素转化酶；猪肺；阴离子交换；超滤离心；纯化 中图分类号：Q814．1 文献标志码：A 文章编号：2095—1191(2014)04—0639—04 Extractionandpurificationofangiotensinconverting enzymefrom fleshhoglung ZHOULi-qin，LIAODan-kui，SUNJian-hua，WUShan-guang，LANXiong-diao， ZHOUJing-hao，XUCun-hua (SchoolofChemistryandChemicalEngineering，GuangxiUniversity，Nanning530004，China) Abstract：0【 ective】Extractionandpurificationofangiotensinconve~ingenzyme(ACE)wasstudiedtoprovidetechni— calsupportforitsproductionandutilization．M【ethod]ACEcrudeextractswerepurifiedbyDEAE-SepharoseFFanionex— changeanduhrafiltrationafterthefreshlunghomogenatewascentrifuged，precipitatedanddialyzedusingammonium sulfate． ACEmolecularweight，specificactivity，purificationfoldandactivityrecoveryweredetermined．【Result]LungACEobtained bySDSshowedACE-pureandmolecularmasswas182kDa．TheACEwaspurifiedto357．31-foldwithspecificactivity of1．2476U／mgandactivityrecoveryof12．28％．TheMichaelis-constantoftheACEwas0．849mmo]]LandV— was9．775 nmol／min． C【onclusion】Theionexchange-ultrafiltrationisanefficientpurificationmethodofrlungACE，asitcangreatly short