玉竹多糖中蛋白质去除方法的对比研究.pdfVIP

一 262一 江苏农业科学 2012年第40卷第9期 刘俊霞，王艳玲．玉竹多糖中蛋白质去除方法的对比研究[J]．江苏农业科学，2012，40(9)：262—264 玉竹多糖中蛋白质去除方法的对比研究 刘俊霞，王艳玲 (吉林农业科技学院，吉林吉林 132101) 摘要：研究不同方法对玉竹多糖脱蛋白效果的影响。采用4种方法 ，即沙维积法 (Sevag法)、三氯乙酸法(TCA 法)、酶法、酶法与 Sevag法联用，通过比较不同方法处理后多糖的蛋白含量及多糖含量来确定最佳的脱蛋白方法。结 果显示 ，玉竹多糖脱蛋白的最好方法是酶法与Sevag法的联用，用于去除玉竹粗多糖中蛋白质成分切实可行，可作为 纯化玉竹粗多糖的手段之一。 关键词 ：玉竹；多糖；脱蛋白；多糖损失；对比研究 中图分类号：Q819 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2012)09—0262—02 玉竹为百合科 (Liliaceae)黄精属 (Polygonatum)植物玉 利多仪器(上海)有限公司；离心机 ，德国SIGMA3K15。 竹 [Polygonatumodoratum(Mil1．)Dmce]的干燥根茎，野生型 2 方法与结果 分布很广，是常用中药之一，自古以来广泛被医家所用。玉竹 多糖是玉竹中主要有效成分之一，具有养阴润燥、生津止渴的 2．1 标 准曲线的绘制 功能…。现代药理试验研究证明，玉竹多糖生理活性显著， 2．1．1 葡萄糖标准溶液的配制 精确称取 105oC干燥至恒 具有降血脂、降血压、改善心肌缺血等作用 。多糖是玉竹 重的葡萄糖 0．10g，用蒸馏水溶解并定容到 100mL，即为 中的活性成分，也是药典中含量测定的检测指标，但在提取玉 1．0mg／mL的葡萄糖储备溶液。吸取 10．0mL葡萄糖储备溶 竹多糖的过程中，玉竹粗多糖中含有大量的蛋白质，导致所提 液于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，作为葡萄糖标 取的玉竹多糖纯度不高。本研究分别采用常规Sevag法、酸 准溶液。 类物质 (TCA)沉淀法和蛋白酶水解法进行玉竹多糖的脱蛋白 2．1．2 苯酚溶液的配制 取苯酚 100g，加铝片0．1g和 试验 ，并对比研究这几种方法的除蛋白效果和多糖损失情况， NaHCO30．05g，蒸馏后收集 182oC馏分，称取 10．0g，加蒸馏 从而筛选出玉竹多糖的最佳脱蛋白方法，为玉竹多糖的纯化 水溶解并定容于200mL容量瓶中，放冰箱备用。 提供有力依据。 2．1．3 多糖标准曲线 分别精确量取葡萄糖标准溶液 0、 0．2．0．4、0．6、0．8、1．0mL于具塞试管中，分别加蒸馏水至 1 材料与仪器 1．0mL，再分别加入 5％苯酚溶液 1．0mL，摇匀后加浓H：s0 1．1 药材来源 5．0mL，充分摇匀，置40℃水浴中恒温30rain，取出冷却至室 新鲜玉竹采 自吉林左家实验教学基地，经吉林农业科技 温。另用蒸馏水 ，同上操作为空白对照，在490nm处测定吸 学院王艳玲教授鉴定为百合科黄精属植物玉竹[Polygonatum 光度，以吸光度 (D4 )为纵坐标，多糖含量(g)为横坐标绘 odoratum (Mil1．)Druce]的根茎，切断后，55℃烘干备用。 制标准曲线。回归方程：Y=O．O118X+0．0116(，=0．9996， 1．2 试验试剂 n=5)，结果表明，在多糖浓度0—100 g范围内线性关系 木瓜蛋白质酶 ，北京奥博星生物技术有限责任公司；考马 良好。 斯亮蓝G一250、牛血清白蛋白，南京建成生物工程研究所；葡 2．1．4 蛋 白质标准 曲线 称取牛血清 白蛋 白 lOmg，置 萄糖、苯酚、铝片、