猪肺血管紧张素转化酶分离纯化的工艺优化.pdfVIP

第 39卷 第6期 广西大学学报 ：自然科学版 Vo1．39No．6 2014年 l2月 JournalofGuangxiUniversity：NatSciEd Dee．2014 文章编号：1001_7445(2014)06—1371-07 猪肺血管紧张素转化酶分离纯化的工艺优化 涂振兴，陈锡鸿，廖丹葵，兰雄雕，孙丽霞，和筱宇，卢姗姗，王燕兰 (广西大学 化学化工学院，广西 南宁 530004) 摘要：血管紧张素转化酶 (angiotensinconvertingenzyme，ACE)存在于生物体组织和血液中，并在血压调控方 面发挥着重要作用，高效分离纯化 ACE对研究其结构和功能具有重要意义。文中将猪肺匀浆液进行酶解处 理 ，优化浆液比、盐析初始蛋白浓度等条件，并经盐析、透析和离子交换层析等步骤 ，得到高活性的ACE。当 猪肺以1：3浆液比匀浆并经胰蛋白酶处理 1h后 ，其总酶活可增加27．06％；匀浆后初始蛋白浓度为3％时进 行盐析，同时将废弃的一级盐析沉淀蛋白再回收处理，盐析过程粗酶纯化倍数为3．94倍 ，总酶活回收率可达 73．73％，较常规处理提高了24．33％以上 ，经离子交换层析后，ACE酶比活为0．1303U／mg，总酶活回收率为 59．14％。ACE酶学性质研究表明，ACE的最佳反应温度为42℃，最适 pH为8．3。由酶促反应动力学方程计 算得到的猪肺 ACE的米氏常数 为 1．521mmol／L，最大反应速率 为 17．301nmol／min。新分离纯化工艺 可使ACE收率大大提高。 关键词 ：血管紧张素转化酶；猪肺；纯化 ；优化 中图分类号：Q814．1 文献标识码 ：A Processoptimizationforseparationandpurificationof angiotensinconvertingenzymefrom piglung TU Zhen—xing，CHEN Xi—hong，LIAO Dan—kui，LAN Xiong-diao，SUN Li-xia， HEXiao—yu，LU Shan-shan，WANG Yan—lan (SchoolofChemistryandChemicalEngineering，GuangxiUniversity，Nanning530004，China) Abstract：Angiotensinconvertingenzyme(ACE)isonekindofproteaseexistedinthebiological tissueandblood，whichplaysaveryimportantroleinbloodpressureregulation．How topurifyACE efficiendyissignificantforthestudyofACE structureandfunction．Freshpiglungwashomogenized and digestedwiththetrypsin．Theinfluencefactorsincludingconcentration ofhomogenizationand initialconcentrationofproteinwereoptimized．HighactivityACEwasobtainedaftersaltingout，di— alysisandionexchangechromatograph．Theenzymeactivitywasincreasedby27．06％ whenthepig lungwashomogenizedatratioof1：3anddigestedbythetrypsinofr1h．Th ehomogenaratewascen- trifugedandtheproteinconcentrationofthesupematantwasdilutedto3％ beforetwostepssalting— out，whi