右旋美托嘧啶在体外循环中对NF-κB及其他炎性介质表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 右旋美托嘧啶在体外循环中对NF-κB及其他炎性介质表达的影响 陈翀 （浙江大学医学院附属第二医院麻醉科 浙江杭州 310009） 【摘要】目的 研究NF-KB在体外循环中活性表达的影响及与TNF一alpha;、IL一1活性表达的相关性。方法 选择CPB心内直视下瓣膜置换术手术患者30例，随机分成对照组和右旋美托嘧啶组，每组15例，右旋美托嘧啶组在入室后给予右旋美托嘧啶1mu;g/kg负荷量（15min内泵入），通过ELISA法－双抗体夹心法测定麻醉诱导后CPB前(T1)，CPB后30min(T2)、CPB后1h(T3)、CPB后4 h(T4)、手术结束(T5)、手术结束后24h(T6) 的NF-kappa;B 及TNF-alpha;，IL-1的表达。结果 两组患者在T3T4时NF-kappa;B 及TNF-alpha;，IL-1的表达较T1有明显增高，但右旋美托嘧啶组活性表达较对照组显著降低。结论 在CPB中应用右旋美托嘧啶能够抑制NF-kappa;B及其他炎性介质的活性表达。 【关键词】 右旋美托嘧啶 体外循环 核因子-kappa;B 炎性介质 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）17-0077-02 体外循环（CPB）心内直视手术中，各种手术相关因素可引起复杂的全身炎症反应，严重时可引起脏器功能不全，大量的文献表明NF一KB在调控众多炎症介质的基因表达中起着关键作用。右美托咪定(dexmedetomidine)是一种高选择性alpha;2-肾上腺素能受体激动剂，具有镇静、镇痛、催眠、抗焦虑、抑制交感神经活性等特点。研究发现，右美托咪啶可降低脓毒症病人TNF、IL-1和IL-6的水平[1]，抑制大鼠内毒素性休克导致的炎性反应[2]。本研究拟评价右旋美托嘧啶对体外循环中NF-KB活性表达的影响及与TNF一alpha;、IL一1活性表达的相关性。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选择2010年全年CPB心内直视下瓣膜置换术手术患者30例，年龄20-65岁，其中男18例，女12例，随机分成2组，对照组和右美组，每组15例，患者心功能均在Ⅱ-Ⅲ级，全身其他脏器功能基本正常，无其他严重并发症。 1.2 麻醉及手术方法 患者常规术前30min肌注杜冷丁1mg(kg(1，东菪莨碱0.3mg。右美组给予右美托咪啶负荷量0. 8 Lg/ kg，手术开始前10 min 匀速输入，维持剂量0. 2- 0. 7Lg/ kg/ h ;对照组给予等体积的0. 9% 生理盐水, 持续静脉注射。两组患者手术开始前10 min 行快速诱导给予上述/kg，舒芬太尼1-1.5mu;g/kg，顺势阿曲库胺0.15mg/kg，异丙酚1mg/kg，气管插管完成后机给予械控制通气；术中持续输注异丙酚5-8m/kg/hr，并间断追加给药舒芬太尼、顺势阿曲库胺麻维持醉，常规监测心电图、血氧饱和度、呼气末CO2、中心静脉压、有创动脉血压。所有手术经胸骨正中径路，常规建立CPB：选用膜式氧合器，全晶体液预充转流，鼻咽温26-30℃，灌注压8.0-10.7 KPa。所有患者均顺利脱机，多巴胺或多巴酚丁胺2-5mu;g/kg/min，硝酸甘油0.5-5mu;g/kg/min维持血流动力学稳定，术后所有患者均痊愈出院。 1.3 试验方法 分别在诱导后行CPB前(T1)，CPB开始后30min(T2)、CPB开始后1h(T3)、CPB开始后4 h(T4)、手术结束(T5)、手术结束后24h(T6).采集中心静脉血标本8ml，平均采集至EDTA试管及BD试管。将EDTA试管中血液样本置于4ml的磷酸盐缓冲液（PBS液）中，充分混和后，加入淋巴细胞分离液中，离心（3500rpm，15min)，将淋巴细胞层提取，用PBS液冲洗后离心（13000rpm，5min)，抽取上清夜，并快速震荡沉淀物。参照Pierce公司的核-胞浆蛋白制备试剂盒 (Nuclear-Cytosol Extraction Kit) 说明书将20ul沉淀物取出，放入CERI 200ul，震荡15s，冰浴10min，加入CERII 11ul，快速震荡5s，冰浴1min，离心（13000rpm，1min)，将上清液取出（胞浆），冷藏于－70℃。将沉淀层取出加入NER100ul，快速震荡15s后冰浴10min，反复4次，离心（13000rpm，10min)后取上清液并－70℃冷藏。应用过ELISA法－双抗体夹心法测抗原测定P50，定量上清液，将10ug核蛋白取出加入30ul凝胶缓冲液和溶解缓冲液，制成载玻片在室温下孵育1h，洗涤