epMotion5075LH自动移液工作站.PDFVIP

No. 9 epMotion ® 5075 LH 自动移液工作站 结合DNA IQTM 试剂系统 在自动提取法医DNA 样品上的应用 摘要 在法医实验室，对 DNA 样品用于刑侦案件的取证和认定的 需求日益增多，为了满足快速增长的 DNA 分析需求，液体 处理工作站被广泛的应用于这一领域。epMotion 是一款灵 活、精确的自动移液系统，可以应用在法医案件中相关样品 的 DNA 自动提取。本文介绍的实验案例表明了 epMotion TM 5075 LH 大型多功能移液工作站结合 Promega DNA IQ 试剂系统，可以对法医 DNA 鉴定中遇到的各种类型的样品 进行自动提取。本结合方案中也评估了 DNA 的产量和潜在 的交叉污染。 对于自动化提取 DNA ，选择合适的核酸提取方法非常重要。 有机溶剂提取（苯酚 / 氯仿）不仅需要接触有害的化学溶剂 还需要繁多的离心操作。Chelex 提取法虽然快速而且成本 低廉，但很容易在提取的最终产物中残留 PCR 抑制剂。以 silica 膜基质为原理的提取方法虽然不需要离心操作，看似 可应用于自动化提取过程，而且 DNA 产量也比较高，但也 样品的准备 比较容易残留 PCR 抑制剂（Greenspoon， 2004 ）。 ● 本实验中使用的血液样品来自于实验室员工 ● 烟蒂样品来源于实验室员工，取 6 mm 切块 我 们 选 用 Promega 公 司 的 DNA IQTM 试 剂 系 统 结 合 ● 口腔拭子是采用4N6 DNA 拭子从实验室员工采集，采 epMotion 移液工作站是由于该系统能有效快速的提取小量 集后，拭子置于室温下干燥 48 小时以上 DNA ，对微量 DNA 样品的提取（小于 50 pg ）也有比较好 ● 干血斑拭子是采用 4N6 DNA 试剂盒采集。干血斑的制 的效果。DNA IQTM 试剂广泛的应用在法医 DNA 的手工提 备是将 10 µl 全血滴在干净拭子表面，置于室温下干燥 取实验中，而且适用于各种法医样品，包括口腔拭子、血斑、 48 小时以上 烟 蒂、性 侵 犯 样 品 和 各 种 组 织 （Promega Technical Bulletin #TB296）。 样品的裂解 第一步样品裂解处理（95 ℃， 混匀 30 分钟），在 Eppendorf TM 以下描述的 DNA 自动提取过程是根据 Promega DNA IQ Thermomixer 恒温混匀仪上进行，手工法和自动提取两个 试剂系统的标准提取方法在 Eppendorf epMotion 5075 LH 实验同时进行。对所有样品均加入500 µl DNA IQ 裂解液（已 大型多功能移液工作站上运行的。口腔拭子和血斑拭子是采 加 DTT ）。然后将经过裂解处理后的烟蒂（6 mm 切块）、口 用 MicroRheologics （Copan Innovation Group ）的新型拭 腔 4N6 取样拭子、口腔普通取样拭子以及 4N6 DNA 试剂盒 子进行采样。这种拭子是专门针对法医学应用设计的。 采集的干血拭子放入离心套管中，离心富集，以获取最佳的 DNA IQTM 试剂系统中的磁性