多成分药物序贯代谢方法用于川芎水煎液多成分不同阶段吸收代谢分析.docVIP

精品论文 参考文献 多成分药物序贯代谢方法用于川芎水煎液多成分不同阶段吸收代谢分析 张岩 　　哈尔滨市呼兰区第二人民医院 150518 　　【摘 要】研究分析多成分药物序贯代谢方法用于川芎水煎液多成分不同阶段吸收代谢分析情况。川芎是高频使用的传统常用中药，课题组前期已经运用高效液相色谱法对川芎多成分序贯过程进行了研究，该研究中表明以色谱峰为代表的川芎多成分中，原型吸收种类较多，代谢转化种类相对较少。本论文在前期研究基础上，运用在体封闭肠环法结合液质联用技术，定性分析成分类型，系统阐述川芎多成分的肠道菌群代谢、肠壁代谢和肝代谢的序贯过程，并遴选出以原型吸收为主的成分作为下一步中药生物药剂学分类系统中肠渗透性评价的首选成分。 　　1材料 　　Thermo 液质联用系统（美国赛默飞世尔科技），包括ultimate 3000高效液相色谱仪，自动进样器，DAD检测器，柱温箱，二元泵和LTQ Orbitrap质谱；Xcalibur，Metworks和 Mass Frontier 70用于数据采集和处理；电子分析天平（BT25S，北京赛多利斯仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（DZKW4，北京中兴伟业仪器有限公司）；超声波清洗器（KQ500DE，昆山超声仪器有限公司）；115PK离心机（德国Sigma 公司）；蠕动泵（BT1001F，保定兰格恒流泵有限公司）；QL901漩涡混和机（其林贝尔仪器制造公司）。 　　川芎饮片（购买于北京同仁堂药店）经北京中医药大学张贵君教授鉴定为伞形科藁本属植物川芎Ligusticum chuanxiong的干燥根茎；对照品阿魏酸（Aladdin，纯度99%，批号F1110835g）、藁本内酯（中检院，纯度ge;98%，批号ZJ0724BB13），对照品洋川芎内酯A（纯度ge;98%，批号140914）、洋川芎内酯Ⅰ（纯度ge;98%，批号141027）和正丁基苯酞（纯度ge;98%，批号130907）购于成都普菲德生物技术有限公司；甲醇、乙腈（色谱纯，Fisher公司），1氨基苯并三唑（北京百灵威有限公司），娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。其余试剂均为分析纯。 　　SD大鼠，雄性，体重280～330 g，斯贝福（北京）实验技术有限公司提供，许可证号SYXK（京动物饲养于北京中医药大学实验动物部标准屏障环境内，自由饮食，明暗节律12 h/12 h。实验前适应性喂养大鼠1周以上，自由饮水和进食。 　　2方法 　　21溶液配制 　　211KrebsRingerprime;s营养液（KR液）配制称取NaCl 780 g，KCl 035 g，CaCl2 037 g，NaHCO3 137 g，NaH2PO4 032 g，MgCl2 002 g，葡萄糖140 g；加蒸馏水定容至1 000 mL，调节pH到739～741，放置备用。 　　212川芎水煎液的制备取川芎饮片100 g，精密称定，置具有冷凝回流装置的圆底烧瓶中，加1 000 mL去离子水，浸泡1 h后回流提取15 h，趁热过滤出提取液。再向烧瓶中加入1 000 mL去离子水，回流提取1 h，趁热过滤出提取液。合并提取液。滤液经过水浴浓缩，并用KR液定容至100 mL，制成含生药1 g?mL-1的溶液，作为灌肠药液。取适量水提液加蒸馏水制成相当于药材质量浓度为10 g?L-1溶液，用022 mu;m滤膜过滤，取续滤液进行液质分析。 　　213对照品的配制分别精密称取适量阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯I、正丁基苯酞对照品于10 mL量瓶，甲醇溶解稀释为质量浓度约为10 mg?L-1的对照品溶液进行液质分析。 　　22实验动物手术方法 　　221肠道菌代谢研究15只SD大鼠禁食12 h，自由饮水，分为2组，12只为供血组，3只为实验组，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，实验组腹主动脉取血，血液放于肝素化离心管置于37 ℃水浴锅中保温。在实验组大鼠颈静脉插管输血，保证实验过程的血液损失得到补充，肠系膜静脉插管收集血液。沿其腹中线打开腹腔约3～4 cm选取结肠，在肠段首末端事先系上丝线，用注射器将药液注入肠腔。当药液到达肠段末端，用丝线结扎，然后取下注射器并结扎肠段前段。通过蠕动泵从颈静脉给实验鼠供血。在蠕动泵另一端开始收集血液，同时结扎门静脉，待实验完成后，收集肠道内药液。 　　无肠道菌实验手术方法与有肠道菌实验相同，不同之处在于药液被注入小肠前，于小肠末端切一横向口，用温热的生理盐水洗净肠内容物后再进行后续操作。实验持续15 h，收集的血液放入肝素化的离心管中，4 000 r?min-1离心10 min，取上清液加入3倍量甲醇，涡旋2 min，1万 r?min-1离心10 min，取上清液过045 mu;m滤膜，进行液相分析。 　　222肠壁酶代谢研究