酪蛋白水解物的类蛋白反应修饰及其产物ACE抑制活性特征.pdfVIP

60 2011，Vo1．32，No．19 食 品科 孛 ※基础研究 酪蛋白水解物的类蛋白反应修饰及其 产物ACE抑制清眭特征 孙 辉，赵新淮 f乳品科学教育部重点实验室，东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要：采用碱性蛋白酶水解酪蛋白，制备水解度为 10．9％、IC5o值为52．6~tg／mL的酪蛋白水解物，并利用响应 面法优化碱性蛋A酶催化的类蛋白反应修饰条件。修饰反应时间固定为6h时，适宜的条件为酶添加量3．1kUg／pro、 底物质最浓度50g／100mL、反应温度25℃。制备9个修饰程度不同的修饰产物，结果显示：修饰产物ACE抑制活 性均提高，并且活性最高的修饰产物的IC5o降低至 14．9 g／mL。该修饰产物离心分级后，上清液部分和沉淀部分 的ACE抑制活性分别低于和高于修饰产物，表明沉淀部分是提高ACE抑制活性的主要原因；Tricine．SDS—PAGE电 泳分析表明，修饰产物及沉淀部分有较大分子质量的肽分子生成；该修饰产物和上清液部分、沉淀部分的进一步 酶水解处理则显示，酶水解会导致它们的ACE抑制活性降低，但是仍然高于最初的酪蛋白水解物。 关键词：酪蛋白水解物；碱性蛋白酶；类蛋白反应；ACE抑制活性 ModificationofCaseinHydrolysatebyAlcalase--catalyzedPlasteinReactionandACE-i·nhibitory ActivityofModifiedProducts SUN Hui，ZHA0Xin．huai* (KeyLaboratoryofDairyScience，MinistryofEducation，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin 150030，China) Abstract：Caseinhydrolysatewithahydrolysisdegreeof10．9％andnaACE-inhibitoryICs0of52．6ug／mEWaSpreparedby hyrdolyzingcaseinwihtalcalasena dhtenmodifiedbyalcalase—catalyzedplasteinreaction．Whenhtereactiontimewasfixedat 6h，theoptimalreactionconditionswereachievedbyresponsesurfacemehtodologytobeenzymedosageof3．1kU／gprotein， reactiontemperatureof25℃ nadsubstrateconcentrationof50g／100mL．Ninemodifiedcaseinhydrolysateswiht different modificationdergeeswere prepared．TheresultsindicatedhtateachmodifiedcaseinhydrolysatehadehnancedACE-ihnibitory activity．TheICsoofthemodifide hyrdolysatewihthtehighestactivityWas 14．91ag／mL．Thismodifidehydrolysatewascentrifugde intotworfactions，asupematantnadaprecipitationrfaction．Thesupematantnadprecipitationrfactionsrevealedardeucednad enhnacedACE—ihn ibitoryactivitywhencompraedwiht theirsuspension，suggestingthathteprecipitationrfactionacco