细胞生物学大实验实验指导.pdf

生物秀实验频道——努力做您的实验助手 ！  /bio101/  细胞生物学大实验实验指导 细 胞 生 物 学 大 实 验 实 验 指 导 生物秀搜集整理 版权归原作者 生 物 秀 搜 集 整 理 版 权 归 原 作 者 仅供学习参考 不得用于商业 仅 供 学 习 参 考 不 得 用 于 商 业 w w w . b b i o o . c om 生物秀论坛 /bbs/ 实验一  DNA显示和细胞有丝分裂相的观察 核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。 它们在细胞 内的分布及化学性质均有所不同。DNA 主要分布在核的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA  分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有少量的 RNA，核仁中也有少量的 DNA。在线粒体， 叶绿体等细胞器内除含有 RNA外，也含有少量的 DNA。 一、 目的与要求 了解 Feulgen 反应的基本原理，学习其操作方法和压片法， 初步掌握细胞分裂各期的主要特点。 二、 原理  Feulgen反应的原理是根据 DNA经弱酸（1mol/L）水解后， 打开料嘌呤和脱氧核糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成有 离的醛基。这些醛基就在原位与 Schiff 试剂结合，形成含醌 基 （ ）的化合物，醛基是一个发色团所以具有颜色， 因此凡有 DNA 的部位，就呈现紫红色。 三、 实验内容  1．DNA 的显示法­Feulgen反应  2．压片法  3．细胞有丝分裂相的观察 四、 实验步骤 （一） DNA 的显示法­Feulgen反应 以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行 Feulgen 反应的具体 操作程序如下: 中国生物科学论坛 【生物秀论坛】  1  /bbs/  生物秀实验频道——努力做您的实验助手 ！  /bio101/  切取根尖  ↓  长度 0.3­0.5cm  Camoy 固定剂  ↓  固定 10­30分钟  95%酒精  ↓    10分钟  70%酒精  ↓   10分钟 蒸馏水  →(对照)   5%三氯醋酸  o  ↓  ↓90 C   15分钟  1mol/L HCl   ←  蒸馏水  ↓  室温  1mol/L HCl  o  ↓   60 C   8 分钟  Schiff试剂  ↓   40 ­60分钟 亚硫酸水(1,2,3)  ↓  换 3次,每次 5分钟 自来水  ↓  将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料 蒸馏水  ↓  压片  ↓  镜检  (二) 压片法 压片的操作步骤如下,把根尖放在载片上,用刀片切取根尖(0.3cm),纵切根尖,加一滴水,用解剖针将根尖纵向 分成若干小条,保留 1­2小条,加盖玻片,用铅笔端轻轻敲击盖玻片,使细胞分离、压平呈云