P47模拟多肽抗原在诊断侵袭性白色念珠菌感染中的应用.pdfVIP

288 chineseJoumalofclinical 临床检验杂志2008年第26卷第4期 Laboratory 文章编号：1001-764x【2008)04旬288旬3中图分类号：R446．5 文献标识码：A ·{趼究生园地· P47模拟多肽抗原在诊断侵袭性白色念珠茵感染中的 应用木 。 周万青，潘婕，李芳秋，曹彤，王立魁，邵海枫(南京军区南京总医院解放军I临床检验医学研究所中心实验科，南京 210002) 摘要：目的利用噬茵体肽库来源的P47模拟抗原建立的ELIsA法，探讨该模拟抗原在侵袭性白色念珠茵病血清学诊断中的 应用价值。方法收集经培养确诊的各类念珠茵侵袭性感染和浅表感染的病人血清130份，用模拟抗原包被ELIsA微孔板， 测定抗P47抗体，考察该方法能否区分白色念珠茵侵袭性感染和浅表感染，以及与其他念珠茵感染的交叉反应。结果经细 然与热带念珠茵侵袭性感染有部分交叉反应，但仍可用于白色念珠茵侵袭性感染的血清学诊断。 关键词：模拟抗原；白色念珠茵；侵袭性感染；酶联免疫吸附试验 目前对于白色念珠菌侵袭性感染的诊断主要根 P47的提取和纯化过程复杂，制备困难且不稳定，蛋 据血培养中分离出病原菌，但方法敏感性低，不利于 白质得率较低，难以大量制备。本实验采用从噬菌 早期明确诊断和早期用药治疗。 体展示肽库中筛选的P47蛋白的噬菌体模拟抗原替 血清学诊断白色念珠菌感染的特异性和敏感性 清中抗P47抗体，并与细菌培养结果比较，评估其临 可分别达93％和80％，且73％的阳性结果可早于 d¨J。 床应用价值。 血培养2d，有些病例甚至可早于血培养15 提示用血清学方法可为侵袭性念珠菌病的早期诊断 1材料和方法 和抗真菌治疗提供重要依据。本科前期的研究表 1．1血清标本收集各类念珠菌培养阳性的住院 明，EuSA法检测血清抗白色念珠菌菌丝相蛋白病人血清130份，见表l。取自健康献血者血清100 P47的抗体对诊断该菌深部感染有重要价值‘2I。但份，作为正常对照组。 表l 130例念珠茵培养阳性患者的相关资料 1．2 主要试剂与仪器 宿主菌E．co尻ER2738由化物酶(HRP)标记的兔抗人IgG由川博公司提供； BioLabs公司提供；模拟白色念珠菌菌丝蛋白P47的550型Microplate 噬菌体克隆由本实验室从12肽库中筛选；辣根过氧 宰基金项目：国家自然科学基金；南京军区医学科学技术研究“十一五”计划重点基金(06243)。 作者简介：周万青，19引年生，男，硕士研究生。主要从事分子免疫学研究。 通讯作者：李芳秋，E—mail：njl蛔@jlordi∞．c∞。 chineseJo啪alofClinical 289 临床检验杂志2008年第26卷第4期 Laboratory Science，2008，V01．26，No．4 体展示肽库使用手册。挑宿主菌E．co如ER2738单2．4方法的精密度1～3号阳性病人血清和1—3 个菌落至液体LB培养基中，37℃振荡培养到对数号正常人血清(共6份血清)用模拟抗原建立的 生长期，接种所筛选的可与抗P47单克隆抗体结合 的噬菌体克隆，37℃振荡培养4．5h。将培养物转 2．2％。 Ooo 移至离心管，4℃12 r／min离心10min，取上清 2．5患者血清的检测结果见表2。 PEG8 液，加入1／6体积的PEG／NaCl(200g／L 000， 表2患者血清抗P47抗体的检测结果 2．5moL／L Nacl)，4℃过夜。次日将PEG沉淀物于 4℃12000