微囊化共固定细胞和辅酶体系制备L苯丙氨酸的研讨.pdfVIP

ImmobilizationOfcells and coenzymebymicrocapsules f10r of preparation L—phenylaIanine Dissertation Submittedto Nanjing of UniVersityTechnology i11 mlfilhnentof panial requirement forthe of degree Master0f Engineering By X洫feng‰g Assoc．Prof．HuaZhou SupeIVisors： 2008 April 摘 要 L．苯丙氨酸是组成蛋白质重要的氨基酸之一，作为人体必需的氨基酸在医药 和食品添加剂行业有广泛的用途。近年来更多地用来作合成新型保健甜味剂阿斯 巴甜的重要原料使得市场对L．苯丙氨酸的需求猛增。利用固定化细胞制备L．苯 丙氨酸具有较强的竞争性，前期研究发现辅酶磷酸吡哆醛的流失是造成固定化细 胞酶活下降较快的主要原因，本论文通过构建纤维素硫酸钠．聚二甲基二烯丙基 氯化铵(NaCS．PDMD从C)微胶囊固定化体系，实现细胞和辅酶的共固定化， 以获得活性稳定的固定化细胞，为固定化细胞制备L-苯丙氨酸工艺的规模化应 用奠定基础。 本论文主要开展了微胶囊原料纤维素硫酸钠制备，微晶纤维素固定化辅酶磷 酸吡哆醛研究，以及共固定化细胞酶法制备L．苯丙氨酸的研究。 分别以脱脂棉和木质纤维素为原料，选用非均相反应方法制备NaCS，并对 其制备条件进行了优化。确定的优化条件为：选择木质纤维素、浓硫酸：正丙醇 为1．4：l(v～)、反应时间120分钟，反应温度．6℃。并根据确定的反应条件范围， 对制备条件进行优化，最终确定利用木质纤维素在固液比为30：l、搅拌转速为 物产率为54％～65％，取代度39％～42．3％，运动黏度为34。5士2．3mPa·s，产品可 以满足实验需要，且制备过程中表现出良好的稳定性。 下时胶囊不易成型，基本不能制备胶囊，当NaCS浓度高于6％时，由于溶液黏 备得到胶囊膜强较好，满足实验要求。胶囊制备过程中，在其中添加不同类型添 加剂，对其成膜强度考察研究发现添加甘油对胶囊膜强几乎没有影响，添加CMC 和壳聚糖两种离子聚合物时膜强得到一定的提高，在NaCS溶液中添加氯化钙 时，当浓度达到8．59／L时膜强达到5．01N，相比添加别的物质，以及不添加氯化 钙时膜强得到大幅度提高，比较有利于实验及工程应用。微晶纤维素添加量1．6％ 以下，湿细胞添加量8％以下，对胶囊膜强影响较小。 摘要 对微晶纤维素固定化辅酶PLP进行了研究，以微晶纤维素为载体，通过重 氮化反应固定磷酸吡哆醛，SESA最佳使用质量分数为15％、亚硝酸钠的滴定量 为4ml、反应时间为10小时。所制备的微晶纤维素固定化辅酶对维持固定化细 胞活力有效果。 利用NaCS．PD加AAC胶囊共固定化细胞和固定化辅酶，对共固定化条件 进行研究。共固定化细胞制备过程中最佳细胞固定量为5％，固定化辅酶添加量 为O．15％。共固定化细胞酶法制备L．苯丙氨酸最佳转化温度为40℃、最佳反应 pH为9．2，对其进行批次转化，研究得到共固定化细