脉冲场凝胶电泳实验中的问题及解决方案.pdfVIP

第39卷 第5期 河 南 科 技 学 院 学 报 2011年 l0月 V01．39 No．5 JournalofHenanInstituteofScienceandTechnology Oet．2011 doi：lO．3969~．issn．1008—7516．2011．05．014 脉冲场凝胶电泳实验中的问题及解决方案 陈秋芳 ，焦浈 ，押辉远 (1．郑州大学离子束生物工程重点实验室，河南 郑州450052；2．洛阳师范学院，河南 洛阳471022) 摘要：脉冲场凝胶电泳是分离大分子DNA片段的有效方法．就脉冲场凝胶实验中遇到的问题及解决方法进行 了探讨，在充分理解实验原理的基础上对脉冲场凝胶电泳的实验条件进行优化，最终达到利用脉冲场凝胶电泳 得到大分子DNA片段清晰整齐电泳条带的实验效果，为后续实验奠定了基础． 关键词：脉冲电泳；大分子DNA；条件优化 中图分类号：Q503 文献标志码：A 文章编号：1008—7516(2011)05—0055—03 Discussion on theproblemsandcountermeasuresinthe pulsedfieldgelelectr0ph0resisexperiment ChenQiufang1,JiaoZhen1,YaHuiyuan (1．HenanProvincialKeyLaboratoryofIonBeamBio-engineering，ZhengzhouUniversity， Zhengzhou450052，China；2．CollegeofLifeSciencesLuoyang，NormalUniversity，Luoyang 471022，China) Abstract：Pulsedfieldgele1ectmphoresis(PFGE)isaneffectivetechniqueofgelelectrophoresiswhichcanbe usedtoseparatelargeDNA．Thispaperdiscussesthesolutionstotheproblemsencounteredintheprocessofpulsed field gelelectrophoresisexperimentalteaching．The pulsed field gelelectrophoresisexperimentparametersare optimizedon thebasisoffullyunderstanding theprincipleofPFGE．Eventually，we canuse thepulsefield gel eleetrophoresistogetthebetterelectrophoresisbandsofmacromolecularDNAfragments．Thiswilllaythefoundations forafurtherresearch． Keywords：pulsedfieldgelelectrophoresis，largeDNA，optimizationofexperimentalparameters 脉冲凝胶电泳 (pulsedfieldgelelectrophoresis，PFGE)是近年来发展起来的一种分离大片段 DNA的 电泳技术，在现代分子生物学研究中得到了广泛的应用 ．普通的琼脂糖凝胶电泳是借助琼脂糖凝胶的 分子筛作用，核酸片段因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离，然而这项技术只能分离 l5～20kh以下的小分子DNA以及质粒 DNA分子，更大的DNA分离用普通琼脂糖凝胶电泳无法达到分 离的目的，从而限制了染色体DNA的分离、生物物种鉴定、微生物基因分型、人类染色体内切酶物理图 谱分析等方面的研究．1984年，Schwa~z和Centor发明了脉冲场凝胶电泳技术，并成功实现了酿酒酵母菌 细胞 16条染色体 DNA的分离DI．目前PEGE技术可以分离 1～