精选实验十一 蛋白质分子量的测定1.pptVIP

实验四 蛋白质分子量的测定SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 主讲人：谢纯刚 08-6-16 * 一 实验原理 1. 电泳： 指带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。 电泳按凝胶形状分： 水平平板电泳、圆盘柱状电泳、垂直平板电泳 电泳按支持物分： 纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、淀粉凝胶电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 * 2. 聚丙烯酰胺凝胶 由丙烯酰胺Acr和甲叉双丙烯酰胺Bis在催化剂的作用下聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链。 Acr 和 Bis 的混合比例主要决定了凝胶的密度、弹性、机械强度、孔径大小等物理性状。 * 3. 蛋白质分子在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率决定于蛋白质分子的大小、带净电荷多少和凝胶孔径的大小。 * 4. 奇迹出现： 1976年Shapiro利用阴离子去污剂SDS,即十二烷基磺酸钠，与蛋白质结合形成SDS-蛋白质复合物。结合SDS后的蛋白质带负电荷大大超过天然蛋白质的电荷，掩盖了不同种类蛋白质之间原有的电荷差异。 但是有一缺点就是凡是影响蛋白质与SDS结合的因素都可以干扰蛋白质分子量的测定。例如二硫键是否被还原，为此需要加巯基乙醇。 发现一个规律： 蛋白质在凝胶中的迁移率与分子量的对数成直线关系。 * 二 实验操作 （一）圆盘柱状电泳 1