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HEV ORF3真核表达载体的构建.pdf

出丕匿荭呈Q!垒生箜塾鲞箜呈翅 HEV ORF3真核表达载体的构建 赵振字。曲振宇,刘新胜 (漯河医学高等专科学校,河南漯河462002) 摘要:目的构建戊型肝炎病毒(HEV)0RF3真核表达载体pcHEV3并进行初步鉴定。方法从实验感染 0RF3 cDNA片 HEV新疆株的猕猴胆汁中提取HEVRNA,逆转录法合成HEVcDNA,采用RT—PCR方法扩增HEV 段,将其克隆至载体质粒pcDNA3,构建HEV0RF3真核表达载体,经抗生素初步筛选后,重组阳性载体进行酶切和 测序鉴定。结果从实验感染HEV新疆株的猕猴胆汁中克隆出HEVORF3全长cDNA片段,经酶切鉴定及DNA 测序鉴定,成功构建HEV0Rf3蛋白真核表达载体pcHEV3。结论成功构建HEV0RF3蛋白真核表达载体,为进 一步研究HEVORf3蛋白的功能提供了条件。 关键词:戊型肝炎病毒;开放读码框架;表达载体 doi:10.3969/j。issn.1002.266X.2014.02.006 中图分类号:R373 文献标志码:A 文章编号:1002-266x(2014)02JD017m3 COnStructiOnOf VectOr HEVORF3 euka吖0tiCexpressioncar哆ing zHA0 Z}吼-”I,UUX汛一s沁ng zhen-,1I,QU (£∞^e胁d站口fcoZ妇e,£∞k462002,劬inⅡ) Tbconstmctthe vector E cDNAaIld Abstmct:Obj烈:tiVe eukaryoticexpressionc哪五nghepatitisvims(HEV)ORF3 of HEV. to HEVRNAwasextractedf而mthebile infectedwith identify macaqueexperimental prelilllin“ly.Methods HEVcDNAwas reactionwithHEVRNAas 0RF3cDNAwas Then synthesizedthroug}lreverse-transcription template.HEV PCRandclonedinto ORF3 vectorwas weused 踟plifiedby plasrrIidpcDNA3.HEVeukaryoticexpression constmcted,then for aJld antibiotics recoⅡlbinarItvectorwasidentified positive byenz)rnledigestionsequencing.I醅 preliIIlinaryscreenjng.The sIlltsAfterthe arId HEV recoⅡlbinantVector enzymedigestionsequencing,the0R乃proteineukaryoticexpression pcHEv3 was constmcted.CoIIdllsi伽s111eHEV0RF3 recoITlbinamvectoris suc

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