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HEV ORF3真核表达载体的构建.pdf
出丕匿荭呈Q!垒生箜塾鲞箜呈翅
HEV
ORF3真核表达载体的构建
赵振字。曲振宇,刘新胜
(漯河医学高等专科学校,河南漯河462002)
摘要:目的构建戊型肝炎病毒(HEV)0RF3真核表达载体pcHEV3并进行初步鉴定。方法从实验感染
0RF3
cDNA片
HEV新疆株的猕猴胆汁中提取HEVRNA,逆转录法合成HEVcDNA,采用RT—PCR方法扩增HEV
段,将其克隆至载体质粒pcDNA3,构建HEV0RF3真核表达载体,经抗生素初步筛选后,重组阳性载体进行酶切和
测序鉴定。结果从实验感染HEV新疆株的猕猴胆汁中克隆出HEVORF3全长cDNA片段,经酶切鉴定及DNA
测序鉴定,成功构建HEV0Rf3蛋白真核表达载体pcHEV3。结论成功构建HEV0RF3蛋白真核表达载体,为进
一步研究HEVORf3蛋白的功能提供了条件。
关键词:戊型肝炎病毒;开放读码框架;表达载体
doi:10.3969/j。issn.1002.266X.2014.02.006
中图分类号:R373 文献标志码:A 文章编号:1002-266x(2014)02JD017m3
COnStructiOnOf VectOr HEVORF3
euka吖0tiCexpressioncar哆ing
zHA0 Z}吼-”I,UUX汛一s沁ng
zhen-,1I,QU
(£∞^e胁d站口fcoZ妇e,£∞k462002,劬inⅡ)
Tbconstmctthe vector E cDNAaIld
Abstmct:Obj烈:tiVe eukaryoticexpressionc哪五nghepatitisvims(HEV)ORF3
of HEV.
to HEVRNAwasextractedf而mthebile infectedwith
identify macaqueexperimental
prelilllin“ly.Methods
HEVcDNAwas reactionwithHEVRNAas 0RF3cDNAwas
Then synthesizedthroug}lreverse-transcription template.HEV
PCRandclonedinto ORF3 vectorwas weused
踟plifiedby plasrrIidpcDNA3.HEVeukaryoticexpression constmcted,then
for aJld
antibiotics recoⅡlbinarItvectorwasidentified
positive byenz)rnledigestionsequencing.I醅
preliIIlinaryscreenjng.The
sIlltsAfterthe arId HEV recoⅡlbinantVector
enzymedigestionsequencing,the0R乃proteineukaryoticexpression pcHEv3
was constmcted.CoIIdllsi伽s111eHEV0RF3 recoITlbinamvectoris
suc
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