Raji细胞基因组文库的构建与筛选.pdfVIP

中南大学学报(医学版) South JCent Univ(MedSci) 185 ·ARTICLES· ·论 著· Raji细胞基因组文库的构建与筛选 高建明1，李小玲2，李桂源2 (1．三峡大学医学院病理生理学教研室，湖北宜昌443002；2．中南大学肿瘤研究所，长沙410078) 【摘要] DNA探针对文库进行筛选。方法：Raji细胞基因 It的：构建Raji细胞基因组文库，用EBV 组DNA经BamHI酶切消化后。低熔点琼脂糖回收9～23kb的酶切DNA片段，通过匹配黏性末端与磷酸 DASHII 化的Lambda BamHI酶切载体臂连接，在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体，测定原始文库 与扩增文库的滴度，用同位素标记的EBV DNA探针对Raji细胞基因组文库进行筛选。结果：Raji细胞原 始文库与扩增文库的滴度分别为1．8×105和2．8×108 pfu／mL。文库经筛选获得4个阳性克隆，随机 挑取1个阳性克隆稀释后铺平板作进一步杂交鉴定，发现所有噬菌斑均有杂交信号，证明该克隆确为阳 kb。经测序、BLAST 性克隆。抽提该阳性克隆DNA，进行BarnHI酶切鉴定，证实插入片段的长度为8．5 BamHI 序列比对，结果显示插入片段一侧为EBV 隆高度同源。结论：Raji细胞基因组文库的成功构建，为进一步克隆包含EBV整合位点的细胞基因组序 列、探讨EBV整合参与肿瘤发生发展的分子机制奠定了基础。 [关键词] Raji细胞；基因组文库； 构建； 筛选 A l 85—07 [中图分类号]Q781[文献标识码] [文章编号] 672—7347(2008)03—01 Constructionand of from cells genomiclibraryRaji screening GAO Jian．min91，LIXiao．1in92，LIGui．yuan2 Hubei of ofMedicine，ThreeGorgesUniversity，Yichang443002； (1．DepartmentPathophysiology，School 2．CancerResearch School Sonth 41 007 Institute，XiangyaofMedicine，CentralUniversity，Changsha8，China) Toconstructthe of cellsandscreenit EBV Abstract：Objective genomiclibraryRaji by DNA molecular DNAof cell