中草药中肝毒吡咯里西啶生物碱的分布与检测研究.pdf

中草药中肝毒毗咯里西淀生物碱的分布与检测 研究生:淮社班 专 业:生药学 导师:王峥涛教授 匿迪 教授 摘 要 毗咯里西咤生物碱 (pyrrolizidinealkaloids,PAs)广泛分布于植物界，特别是菊科、 豆科、紫草科植物中。很多毗咯里西咙生物碱具有明显的肝脏毒性，因此称为肝毒毗咯里 西咤生物碱 (hepatotoxicpyrrolizidinealkaloids,HPAs).HPAs存在于多种药用植物中， 通过文献调查与实验研究，掌握HPAs的分布，建立快速、准确的检测方法，保障临床应 用的安全，将具有重要意义。 本论文根据生物碱的化学特性以及肝毒毗咯里西咤生物碱(HPAs)的电喷雾质谱(ESI MS)裂解特征，利用薄层色谱法 (TLC),液相色谱与多级质谱联用法 ((LC/MS)、质谱 (MS)直接进样法等方法与技术，对菊科、豆科、紫草科等科属多种植物 (其中多数为 药用植物)材料进行了HPAs检测分析，获得了大量第一手研究资料。 1植物中毗咯里西吮生物碱的分布 本论文综述了320余种植物中毗咯里西咙生物碱的分布，并重点介绍了中国有分布或 引种栽培的含毗咯里西咤生物碱植物61种，其中44种为药用植物，分别为:菊科千里光 属千里光、林荫千里光、菊状千里光、额河千里光、麻叶千里光、欧洲千里光，泽兰属飞 机草、多须公 佩兰、白头婆，豪吾属鹿蹄囊吾、大黄聚吾、齿叶真吾、大叶真吾、洱源 舜吾、苍山豪吾、大头索吾，菊三七属菊三七、白子菜，款冬属款冬，兔儿伞属兔儿伞， 蜂斗一菜属蜂斗菜，火吴风草属大吴风草，蕃香蓟属蕾香蓟，一点红属绒缨菊、一点红，狗 舌草属狗舌草 豆科猪屎豆属响铃豆、大猪屎豆、猪屎豆、野百合，紫草科软紫草属软紫 草，破布木属毛叶破布木，琉璃草属倒提壶、小花琉璃草、红花琉璃草、琉璃草，天芥菜 属大尾摇，鹤虱属卵盘鹤虱，紫草属紫草，木麻黄科木麻黄属木麻黄，桑科构属小构树， 兰科虾脊兰属虾脊兰，羊耳兰属见血清等:其中千里光、佩兰、款冬、一点红、野百合、 软紫草、紫草等7种植物为1977年版 《中国药典》收载;千里光、佩兰、款冬、软紫草、 紫草等5种植物为2000年版 《中国药典》收载。 2.毗咯里西睫生物碱的质谱裂解特征 经查阅大量文献，结合前人_作〔，本论文根据其necine与necicacid部分是否闭合成 人环，分为开环PAs和闭环PAs两大类讨论了其质谱 〔电子轰击质谱ElMS及电喷雾离 子化质谱EstMS等)裂解特征。各类PAs由于其骨架和基团的不同可以得到特征碎片离 子 着重讨论了Cl,C2不饱和的PAs即肝毒毗咯里西陡生物碱(HPAs)的质谱裂解特征。 HPAs主要包括两种类型，即RET型和OTO型HPAs.REI，型HPAs的主要特征碎片离子 为m1z138,120,94;OTO型HPAs则为。Iz168,150,122,Est质谱得到的特征碎片 离子峰在El质谱中的信号也较强烈，说明结构决定了质谱裂解特征，但离子化方式不同 又使得质谱裂解图谱不尽相同。比较HPAs的质谱数据，发现ESIMS较EIMs提供的碎 片峰更为简化，碎片峰虽较少，但特征性更强。 对.nonocrotaline(RET型)、isoline(RET型)和clivorine(OTO型)3种HPAs的 EstMs进行了分析。通常单级四级杆质谱仪EstMS仅得到明显的分子离子峰信号;但 随着碎裂器电乐提高，经过碰撞诱导解离 (CID)过程，不仅可以得到分子离子峰信号， 而且也可以得到丰富的碎片离子信号，获得结构信息。本实验用单级四级杆质谱仪、多级 离子阱质谱仪研究了这3种HPAs的EstMS;与文献报道结果相一致。 3，中草药中肝毒毗咯里西陡生物碱的LCIMS检测 根据HPAs的ESIMS裂解特征，利用液相色谱与多级质谱联用法 (Lulls)，进行 了isoline和clivorine混合物的EstMS检测。Isolin。和clivorine的混合物经过HPLC得 到分离，多级质谱 MS提供了此类化合物特有的特征碎片离子信息。据此，我们利用 LCIMS0进行了中草药中HPAs的检测。 本实验对菊科寨吾属大头聚吾等8科24属54种植物 (133份材料)进行了HPAs的 LC/MS检测:共有39种植物中检测到了HPAs，其中25种植物为首次检测到HPAso 首次检测到HPAs的25种植物 (其中14种为药用植物