柑橘衰退病和碎叶病复合感染病原的脱毒研究.pdfVIP

第30卷第4期 华中农业大学学报 Vol-30No．4 of 2011年8月 Jourml HuaLzhongAgriculturalUmversity Aug．201l，416～421 柑橘衰退病和碎叶病复合感染病原的脱毒研究 乔 芬 祁鹏志 伏 卉 张 鹏 吴 珊 姜 玲 华中农业大学园艺林学学院／国家果树脱毒种质资源室内保存中心／ 教育部园艺植物生物学重点实验室，武汉430070 摘要以带毒柑橘品种为试材，采用植物中药制剂处理与热处理结合、茎尖微芽嫁接与植物中药制剂处理 结合，用RT-P(、R法检测病原带毒情况，并在药剂处理后l、3、5、7、9d取样，检测抗性相关酶活性的含量变化， 结果表明：采用板蓝根和黄芩混合中药制剂处理8次，结合热处理，在PC板制成的温室(白天40℃(6h／d)，晚 上25℃，处理50d)中，可有效地脱除试验苗木中柑橘衰退病和柑橘碎叶病复合感染病原；对柑橘茎尖微芽嫁接 苗进行板蓝根和黄芩混合中药制剂脱毒处理后苗木经R，r-PCR法检测表明：85．7％植株可以脱除柑橘衰退病和 柑橘碎叶病病毒；药剂处理后PP0、PoD、SoD酶活性与对照相比均有所提高。 关键词 中药制剂；热处理；茎尖微芽嫁接；复合感染；病原；R-PCR S 436．661．1+2 A 1000一2421(2011)04一0416一06 中图分类号 666；S 文献标识码 文章编号 柑橘为多年生常绿果树，通常采用无性繁殖的 的苗木和接穗的成活率较低。宋瑞林等[4]报道， 方法繁殖后代，伴随着国内外品种引进和交流的频 44℃下处理16h、30～34℃下处理8h，交替处理 Huan— 繁进行，树体极易感染柑橘黄龙病(a￡绝s 8～9周，可除去柑橘的茎陷点型衰退病毒。Mu— tristezavirus， glongbing)、柑橘衰退病(a￡化s hammad等[5]通过35／30℃(白天35℃16h，晚上 tatterleaf virus，30℃8 CTV)、柑橘碎叶病(a￡化s h)处理2周，40／35℃处理1周，然后50／ CTI。V)等病害。柑橘黄龙病是目前柑橘生产上致 40℃处理1周，成功脱除了CTV，但是有大约50％ 命的病害。近些年来，柑橘衰退病和柑橘碎叶病病 的柑橘苗在处理过程中死亡。上述方法单独使用难 原复合感染日趋严重。推行无病毒苗木繁育制度仍 以彻底和安全地脱除柑橘衰退病毒与碎叶病复合感 然是新时期柑橘品种结构调整和大规模基地建设的 染病原，脱毒方法面临着新的挑战。 重要环节，建立一套操作简便、成本低、效果好的脱 前人研究表明，来源于植物的抗病毒剂可以提 除柑橘复合感染病原的程序十分必要。 高植株抗病性、抑制病毒的扩增繁殖、减少病毒的含 传统的脱毒方法主要有茎尖微芽嫁接、热处理 量和病毒侵染。植物抗病毒剂因来源广泛、毒性低、 和珠心胚培养等。茎尖微芽嫁接可以脱除柑橘黄龙 无残留等优点而日益受到研究者的重视。第1个植 病病原[1]，但不能完全脱除柑橘衰退病病原。热处物源病毒抑制物是1914年Allard报告的商陆属 理是一种操作简便且实用性强的脱除病毒的方法， (PJIly￡o比f∞口ci加s口)植物叶子中存在的植物病毒 由Grant在1967年脱除衰退病和鳞皮病毒中首先抑制剂。此后，为了寻找有效的植物源抗病毒剂，研 提出，后续的研究表明热处理还可以脱除柑橘囊胶 究人员进行了大量的研究[6]。在烟草花叶病毒(to— 病、黄龙病等，但是包括裂皮病、碎叶病在内的病害 baccomosaic