ALF大鼠肾脏内移异种植肝细胞后的生化指标观察.docVIP

精品论文 参考文献 ALF大鼠肾脏内移异种植肝细胞后的生化指标观察 韦忠恒 浦涧 汪建初 韦叶生(右江民族医学院 广西百色 533000) 【中图分类号】R657.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2010）27-0150-03 【摘要】　目的　探讨急性肝功能衰竭的大鼠肾脏内移植异种肝细胞后的生化指标变化，观察异种植肝细胞肾脏移植对急性肝功能衰竭大鼠的防治效果。方法　建立大鼠90%肝切除肝功能衰竭模型。切肝术前1d分别植入豚鼠肝细胞和大鼠肝细胞,建立异种移植组、同种移植组及未移植对照组，观察受试大鼠的切肝术后24 h血液生化指标改变。结果　异种移植组血糖（BG）和凝血酶原时间(PT)改善较明显(Plt;0.05)，同种移植组丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）、血糖（BG）、凝血酶原时间PT均有明显改善(Plt;0.05)。结论　异种肝细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭有防治作用。 【关键词】　异种肝细胞 移植 肝功能衰竭 肝移植是可挽救一部分终末期肝病患者生命的有效手段，被认为是“终极武器”，且有逐步普及之势[1]。然而，同种肝移植供体严重缺乏是导致急性肝功能衰竭患者在等待供肝过程中死亡的主要原因。肝细胞移植能提供急性肝功能衰竭的代谢支持，有助于病人的肝细胞再生或使病人自身肝功能的恢复，度过急性肝衰期而等待原位肝移植的进行，因而成为目前肝移植的研究热点。本研究以大鼠急性肝功能衰竭模型为背景，观察异种肝细胞（豚鼠）移植到大鼠肾脏后的生化指标变化，探讨异种肝细胞（豚鼠）移植对大鼠急性肝功能衰竭的防治效果，为异种肝细胞移植提供进一步的实验证据。 材料与方法 一、实验动物 雄性杂种豚鼠,体重300-350g，作为异种移植供体；雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250-300g，一部分用作同种移植供体，其余作为受体。 二、方法 (一)肝细胞分离 参照徐家善等[2]的胶原酶原位循环灌注法，采用锥虫蓝拒染法检测肝细胞活力，获得的肝细胞活力均gt;90%。所得的肝细胞于2 h内移植，不经培养。 (二)肝细胞移植 于切肝前1ｄ进行。受试动物予以乙醚麻醉，经左侧背切口进腹，提出肾脏，阻断肾蒂，以4.5号针沿长轴穿刺，植入供体肝细胞2times;107个。注射后即开放肾蒂，穿刺点止血，将肾脏送回腹腔后关腹。 (三)急性肝功能衰竭模型的制备 实验大鼠用2%的绿氨酮3ML/KG腹腔内注射，开腹切除90%的肝组织，仅保留肝尾状叶，妥善止血，腹腔内灌注庆大霉素，关腹。术后置于21℃环境下，自由饮食，饮水为5%葡萄糖溶液。 (四)实验设计 1.分组：对照组直接行90%肝切除手术；同种移植组于切肝术前1天肾脏内移植大鼠肝细胞；异种移植组于切肝术前1天肾脏内移植豚鼠肝细胞。 2.血液生化指标检测；对照组取8只，同种移植组取8只，异种移植组取8只，各组肝细胞移植和切肝手术的方法及时间同上。3组于切肝术后24h于下腔静脉取血检测丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、结合胆红素(SB)、白蛋白(ALB)、血糖(BG)和凝血酶原时间(PT)。 三、统计学处理 指标比较采用t检验和校正t检验。 结果 各组受试大鼠切肝术后24h血液生化指标较正常值均有明显改变(Plt;0.01)。同种移植组大鼠90%肝切除术后ALT、TB、BG和PT较对照组有明显改善(Plt;0.05)，其中ALT和BG改善尤为明显。异种移植组的BG和PT值较对照组有明显改善(Plt;0.05)；TB也有改善趋势，但差异无显著性(P＞0.05)。其余指标与对照相近。具体数据见表1。 与对照组比较：P＜0.05 讨论 研究发现，切肝术前1 d向大鼠脾内移植同种肝细胞，可不同程度地改善各项肝功能指标[3]。同样，异种肝细胞移植亦有类似的效果。异种移植BG和PT改善，ALT水平与未移植对照组接近，可能与被排斥的肝细胞释放出ALT有关。该结果表明，即使是非协调性配对的异种肝细胞移植，在急性肝功能衰竭的防治上也有一定的应用价值。血液生化指标改变来看，同种肝细胞移植的治疗效果更为明显。 其中的原因可能是异种肝细胞由于早期即受到以体液免疫为主的排斥反应，所以植入后无法从损伤中恢复，反而进一步加重损伤，直至死亡[4]。因此，如能减轻异种肝细胞移植的排斥反应，延长异种肝细胞在受体内的有效存活时间，即有可能使其接