不同类型霍奇金淋巴瘤EBV检测的原位杂交和免疫组化方法比较分析.docVIP

精品论文 参考文献 不同类型霍奇金淋巴瘤EBV检测的原位杂交和免疫组化方法比较分析 汪桂红 （湖北省广水市第二人民医院检验科 432700） 　　【摘要】目的 通过采用原位杂交以及免疫组化方法探究不同类型霍奇金淋巴瘤中EBV的表达，对比两种方式在表达中的意义。方法　对比分析法是应用EBER原位杂交对EBV编码的mRNA在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达与应用免疫组化两步法对EBV中潜伏蛋白在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达进行对比的一种方法，本文采用这种方法对我院自2011年4月～2013年4月收集的200例不同类型霍奇金淋巴瘤标本进行检测，观察两种检测方法的不同表达结果。结果　采用免疫组化方法进行检测的结果阳性率低于原位杂交检测结果的总阳性率。结论　应用原位杂交的方法检测不同类型霍奇金淋巴瘤的检出率明显要高于免疫组化检测法，且具有明确的定位，具有敏感性以及特异性，值得临床推广与应用。 　　【关键词】霍奇金淋巴瘤 EBV检测 原位杂交 免疫组化 比较分析 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）32-0256-02 　　引言 　　随着社会的发展与进步，不同霍奇金淋巴瘤的检测方法也在不断进步，目前我院应用原位杂交与免疫组化方法对EBV进行检测，现将检测结果报道如下。 　　1 一般资料与方法 　　1.1 一般资料 　　我院自2011年4月～2013年4月收集的200例不同类型霍奇金淋巴瘤标本进行检测，分别应用EBER原位杂交对EBV编码的mRNA在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达与免疫组化两步法对EBV中潜伏蛋白在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达观察两种检测方法的不同表达结果，从而找到最佳检测方案。 　　我院采集的标本均应用石蜡进行包埋，且按照世界卫生组织淋巴瘤分类标准进行分类，对标本进行切片，每片3mu;m厚，每例标本取8片进行检测，并通过HE染色——免疫组化/原位杂交——对照染色等进行处理，经过两种方法处理的切片均捞赋于浓度为2％的3-氨基丙基三乙氧基甲硅烷进行处理的玻璃片上[1]。 　　1.2 方法 　　1.2.1 应用免疫组化方法进行检测 　　试剂选择：我院应用上海生产的免疫组化试剂盒。 　　操作方法：选择LMP1鼠单克隆抗体作为即用型抗体，然后应用免疫组化方法进行检测，将标本切片进行脱蜡并水化，采用蒸馏水在常规预温情况下冲洗三次，每次持续时间为3分钟，然后在高压状况下进行加热修复，切片放入浓度为3％的H2O2的室温中进行孵育，孵育时间为10分钟，应用PBS进行冲洗，反复3次，持续时间为3分钟，最后加入二抗在室温中进行孵育，持续30分钟后进行冲洗，最后DNA显色，后进行复染，将其与空白对照进行对比，从而进行检测结果的评定[2，3]。 　　1.2.2 应用EBER原位杂交方法进行检测 　　试剂选择：应用福建生产的原位杂交检测试剂盒。 　　操作方法：首先对标本进行切片，实施脱蜡以及水化步骤，然后在室温下在蛋白酶K中消化5分钟，用蒸馏水对其进行洗涤，洗涤时间为1分钟，再加入杂交液，在水湿盒中用55摄氏度的恒温箱进行孵育，持续1～1.5小时，降低恒温箱温度为37摄氏度，孵育1夜。最后在48摄氏度的温度中浸泡洗涤并切片[4]。 　　对切片进行切片放大并染色，观察染色效果。 　　1.3 统计学分析 　　首先进行数据分析，选用的软件为SPSS17.0。其次采用假设检验方法即卡方检验进行计数资料的对比应用。再次应用Student t检测方法进行计量资料的对比应用。最后检测P值，如果P值＜0.05，那么数据之间存在差异性，说明其具有统计学意义。 　　2 结果 　　表　200例不同类型霍奇金淋巴瘤在两种方法中的阳性率比较 　　在200例不同类型霍奇金淋巴瘤中，免疫组化方法检测出的阳性率为36.5％，其中各亚型分别为NS22.9％，MC66％，LR29.2％，LD38.9％，各亚型之间的EBV感染率存在差异性，具有统计学意义，P＜0.05.EBER原位杂交检出的阳性率为56％，其中各亚型分别为NS41.9％，MC88.7％，LR41.7％，LD61.1％。采用免疫组化方法进行检测的结果阳性率低于原位杂交检测结果的总阳性率，两者数据对比存在显著差异性，具有统计学意义，P＜0.05。 　　3 讨论 　　霍奇金淋巴瘤与EBV感染存在着较大的关联性，在临床检测中，EBV是唯一从中检出的病毒。根据国际卫生组织分型可以讲霍奇金淋巴瘤分为混合细胞型、结节硬化型、淋巴细胞消减型、淋巴细胞丰富型等四个亚型，不同的亚型关联着EBV感染的频度。 　　综上所述，免疫组化方法在检测不同类型霍奇金淋巴瘤EBV感染过程中