低温对制备血涂片的影响.docVIP

精品论文 参考文献 低温对制备血涂片的影响 张志忠 杨鹏（通讯作者） 刘杨 吕波 袁英 张静 (沈阳军区第210医院403临床部 116023) 【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）09-0307-02 血涂片质量高低直接影响白细胞分类计数的结果。我们在实际工作中发现，尽管在血涂片制备过程中严格按照操作规程进行操作，但有时制备的血涂片质量仍不理想，影响白细胞分类计数。我们仔细分析原因后发现环境温度对血涂片制备可产生明显影响，这种情形尤以冬天低温时最为明显。为此，我们通过不断改进相关血涂片制备流程，提高了血涂片制备质量。现将我们的经验总结如下。 1 材料与方法 1.1 材料 硅化过的载玻片，推片，瑞氏-吉姆萨双染，PBS，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球，载玻片使用前必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。选择边缘光滑的载玻片作为推片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm宽度的推片。 1.2 方法 随机选取我院2012年11月～2013年2月间各个科室的血常规标本100例，其中五分类血常规提示白细胞计数正常标本70例，白细胞计数异常标本30例。分别将正常标本和异常标本均分到实验组和对照组，实验组在冬季温度较低条件下（室温0℃）进行，对照在正常室温（20-25℃）条件下进行，均进行如下步骤制备血涂片并进行白细胞计数：（1）采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。（2）推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。以约30度的夹角向前均匀地推动推片制成血涂片。（3）固定：推片做好后，在室温下通风晾干，固定时间5分钟。（4）染色：瑞氏-吉姆萨双染，将染料滴加到血涂片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS溶液，继续染色10分钟。而后用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。冲片结束后从背面滴加基姆萨染液，时间约为10分钟。时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。（5）显微镜观察，进行白细胞分类计数：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。 1.3 统计学分析 组间比较采用chi;2检验。 2 结果 寒冷组50例标本中3例标本未固定住，血膜被水冲破，其余标本处理较好。染色后镜下25例胞浆着色浅，细胞核染色质不清晰，核仁不明显，胞浆胞核染色对比不明显，血涂片血涂片制备合格率为44%。常温组只有1例血推片过厚，血细胞染色清晰，胞核和胞质颜色对比分明，核仁明显(见表1)，血涂片制备合格率为98%。两组比较chi;2为36.67，实验组和对照组有显著性差异 (P＜0.05)。 3 讨论 为提高血涂片质量，减少人为因素的影响，一些大的医院和经济水平较好地区医院检验科都配置了带全自动推片机的五分类血常规分析仪，加强血涂片制备的标准化管理，提高血涂片???备的质量。但在一些基层医院检验科仍然使用手工染色，尽管这些医院检验科技术人员严格遵守各种操作规程，但有时制备的血涂片仍不理想，以致于不得不重新制片。在影响血涂片制备的各种因素中，环境温度尤其是冬天低温环境对血涂片制备的影响不容忽视。有关此方面的问题，文献或参考书涉及很少。我们的实验证明环境温度对血涂片制备的影响确实存在，特别是低温，可能是由于环境温度低时，化学反应变慢，染色过程变缓，加温可能增加液体物质的交换和穿透力，但温度过高可能使蛋白变性。我们在实际工作中应根据不同的情况，做出相应改变，控制好室温，这样才能做出厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片。 参考文献 [1] 血涂片镜检在血常规检查中的意义，辛小明，基层医学论坛，2012， 16（25）：3343-3344. [2] 外周血涂片检查基本技能及其重要性，龚建红，实用医技杂志，2011，18（10）：1066-1067. [3] 瑞氏染色制作血涂片的几点应用体会，梁艳清，解剖科学进展，2012，18(5)：500. [4] 如何做好外周血涂片细胞学的检查，薛慧芳，基层医学