免疫微菌落染色法（IMCS）快速检出药品中的致病菌.docVIP

精品论文 参考文献 免疫微菌落染色法（IMCS）快速检出药品中的致病菌 王章云 朱小兰 王 岚（湖南慈利县疾病预防控制中心 湖南慈利 427200） 【中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)17-0141-02 【摘要】 目的 探讨免疫微菌落染色法（IMCS）在药品中快速检出致病菌。 方法 采用国内创立的免疫微菌落染色法快速检出药品中污染的致病菌。 结果 本法检出阳性菌的时间只需4-5h，灵敏度比常规细菌培养法高，特异性尚好。 结论 免疫微菌落染色法（IMCS）可作为药品卫生细菌学检测一种简便，快速方法。 【关键词】 免疫微菌落 染色 致病菌 药品 国内创立的免疫微菌落染色法（IMCS）[1]是依据致病菌在含有特异性抗体的增菌液中，能快速粘连性分裂增殖形成免疫微菌落，经染色快速诊断，用于检测药品中的致病菌国内还未见报道。作者采用多价抗痢疾杆菌血清，应用免疫微菌落染色方法快速检出药品中致病菌，获得了好的结果，为药品中致病菌的检测建立一种快速，简易的方法。 1 实验材料 1.1痢疾杆菌免疫血清 系自制福氏多价及宋内氏菌免疫血清[2]，凝集效价这1：6400。 1.2痢疾杆菌菌株 F2a,F3a,宋内氏痢疾杆菌各一侏，系湖南省疾病预防疾控中心供给。 1.3微菌落染色液 青岛市疾病预防控制中心产品。 1.4试验用中成药 驴胶补血冲剂，当归丸，十全大补丸，川贝止咳糖浆，玉竹膏各3份，均来自本中心门诊部药房。 2 实验方法 2.1供试样品制备 以无菌手续分别将F2a,F3a,宋内氏痢疾杆菌植入药丸中，用生理盐水制成1：10混悬液。冲剂用生理盐水1：10稀释成混悬液；玉竹膏用生理盐水1：1稀释成混悬液；糖浆剂用原液，后三种悬液各分三管，分别加入痢疾杆菌混悬液，制成供试品。 2.2 IMCS快速检测增菌液 以蛋白胨水培养基1：10稀释痢疾杆菌抗血清，混匀后，取0.1ml。 加在含有0.8ml增菌液的康氏试管中，然后分别加入上述已制成供试品混悬液0.1ml，混匀，置37摄氏度培育箱培养4-5小时，普通显微镜下观察结果。进行免疫微菌落检测时，每份样品同时用细菌培养法作平行试验。 2.3 涂片与染色 取出经37摄氏度培养的IMCS快速检测试管，吸取试管底部培养液1滴于载物玻璃片上，按1：5（染色液：培养液）的比例用取菌环沾取染色液一环加在玻片上培养液中混合染色，再将盖玻片压上，染色1-5分钟后，在普通生物显微镜下进行结果观察。 2.4免疫微菌落镜检方法 先用低倍镜（10倍）找到涂片视野，寻找是否有散在的大小不等鲜蓝色絮状菌团存在。然后用高倍镜（40倍）鉴别可疑的鲜蓝色絮状菌团的立体细菌形态与菌团。 2.5 阳性结果判定标准 在低倍镜下散在蓝色絮状免疫微菌落，在高倍镜下，可见痢疾杆菌相互粘连重叠组成的鲜蓝色网状细菌集团。发现上述一个免疫微菌落可判为阳性。 3 结果 用免疫微菌落染色法和细菌培养法同时检测41份加阳性菌的样品。经37摄氏度4-5小时培养后，免疫微菌落染色法均能检出现出典型的微菌落。而细菌培养法仅检出35份加阳性菌的样品，表明免疫微菌落染色法检出率高于常规法。检测8份不加阳性菌的对照样品、10份中成药悬浮液中加入正常人大便的样品，结果均无免疫微菌落形成，表明本法具有较好的特异性。 4 讨论 4.1 免疫微菌染色法的特点是利用特异性抗体在含有相应抗原（致病菌）的免疫液体增菌液中粘连性分裂增殖，经37摄氏度4-5小时培养，就可形成免疫微菌落（类似平皿上的菌落，经染色后在显微镜下很容易被观察到，从理论上讲，只要显微镜下找到一个免疫微菌落菌团即可判定为阳性，所以本法具有较高灵敏度[3]。 4.2 由于本方法将免疫学抗原抗体的结合反应与细菌的液体培养相结合，使细菌凝集性快速生长繁殖，只需4-5小时就能形成免疫微菌落，因抗原抗体结合是特异性结合中，故使本方法具有快速，特异的优点。据此推论可用其他细菌的免疫血清检测药品中的其他致病菌。 4.3 由于本法的染色液是非特异性的，药品悬液的固形物质也有可能被着色，但与免疫微菌落的形态有明显区别，在检测中可采取静置或低速离心使样品中固形物沉淀后行本法检查，可减少其干扰。 参 考 文 献 [1]鲁开国等.免疫微菌落染色法快速诊断霍乱弧菌研究，中国卫生检验杂志，4（4）：202-2