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ELISA2-乙肝两对半5
ELISA-2 (乙肝两对半的检测) 临床免疫学教研室 邓念华 【目的要求】 1.掌握乙肝两对半的检测原理及操作过程; 2.熟悉影响乙肝两对半检测的因素; 3.进一步熟悉酶标仪及洗板机使用; 4.了解乙肝两对半的临床意义。 【原理】 【器材】 SM-3型自动化酶免分析仪 ZMX-988B型全自动酶标洗板机 微量加样器 吸头等 【试剂】 HBsAgELISA试剂盒 HBsAbELISA试剂盒 HBeAgELISA试剂盒 HBeAbELISA试剂盒 HbcAbELISA试剂盒 【标本】 待测血清 【操作步骤】 准备:试剂盒各组份在37℃平衡30min; 配洗涤液:用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释; 加样品:每孔加入待测样品75ul/孔,同时设置阳性对照、阴性对照,空白对照(不加样品),轻轻振荡混匀; 孵育:贴上封膜,37℃反应60min; 加酶结合物:每孔加入50ul/孔(空白对照不加),震荡10秒钟; 表面抗原检测(双抗体夹心法) 结果判断及解释 COV=2.1×OD阴性对照 阳性:OD样品≥COV 阴性:OD样品<COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10, OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.04(双波长检测) 准备:试剂盒各组份在37℃平衡30min; 配洗涤液:用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释; 加样品:每孔加50ul,同时设阳性对照、阴性对照和空白对照(不加样品); 加酶结合物:每孔50ul(空白对照不加); 孵育:贴上封膜,37 ℃反应30min; 表面抗体检测(夹心法) 洗板:洗板机5次,每次洗液在孔中滞留时间10-15s,并注满反应微孔; 显色:先加显色液A 50ul,再加入显色液B 50ul,贴上封膜,37℃反应15min(避光); (注:显色从加入第一滴显色液B开始计时) 终止:加终止液50ul; 判读:终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度) 结果判断及解释 COV=2.1 × OD阴性对照( OD阴性对照低于0.05按0.05计算) 阳性:OD样品≥COV 阴性:OD样品<COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10,OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015(双波长检测) 准备:试剂盒各组份在37℃平衡30min; 配洗涤液:用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释; 加样品:每孔50ul,同时设阳性对照、阴性对照和空白对照(不加样品); 加酶结合物:每孔50ul(空白对照不加); 孵育:贴上封膜,37 ℃反应30min; e抗原检测(夹心法) 洗板:洗板机5次,每次洗液在孔中滞留时间10-15s,并注满反应微孔; 显色:先加显色液A50ul,再加入显色液B50ul,贴上封膜,37℃反应15min(避光); (注:显色从加入第一滴显色液B开始计时) 终止:加终止液50ul; 判读:终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)。 结果判断及解释 COV=2.1 × OD阴性对照( OD阴性对照低于0.05按0.05计算) 阳性:OD样品≥COV 阴性:OD样品<COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10,OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015(双波长检测) e抗体检测(竞争抑制法) 准备:试剂盒各组份在37℃平衡30min; 配洗涤液:用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释; 加样品:每孔50ul,同时设阳性对照、阴性对照和空白对照(不加样品); 加酶结合物:每孔50ul(空白对照不加); 孵育:贴上封膜,37 ℃反应30min; 显色:先加显色液A 50ul,再加入显色液B 50ul,贴上封膜,37℃反应15min(避光); (注:显色从加入第一滴显色液B开始计时) 终止:加终止液50ul; 判读:终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)
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