乳汁体细胞计数法.docVIP

乳汁体细胞计数法 本方法源自奶牛乳房炎防治技术指南(试行)（农医发[20l0]29号） 　　推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。 　　体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接用显微镜进行体细胞计数（SCC），间接计数法就是后面提到的CMT。法。 　　l主要试剂和材料 　　美蓝染色液：美蓝乙醇饱和溶液30mL.（美蓝2g，95％乙醇100mL），10％氢氧化钠溶液0.1mL，蒸馏水100mL，将上列溶液混合摇匀，过滤后备用。二甲苯、95％乙醇。生物显微镜、载玻片、l0μL。微量加样器（或移液枪）等。 　　2操作方法 　　2.1涂片制备 　　涂布：充分摇匀新鲜乳样，用l0μL微量加样器吸取中部乳汁l0μL，或用接种环蘸取等量的乳汁，将乳样滴于玻片一端中侧，仔细涂布成约lcm2。面积的乳膜（为便于操作，可在玻片下垫衬一张硬纸板，纸板上用毛笔划数个面积为lcm2的方格透视）。 　　干燥、脱脂、固定：涂好乳膜的玻片于37℃温箱中干燥，然后用二甲苯脱脂5min，再置95％乙醇中固定5～10min。 　　染色：玻片干燥后，用美蓝染色液染色5min。水洗，再用95％乙醇脱色数分钟，水洗干燥后镜检。 　　镜检及计数：在生物显微镜油镜下观察（最好用l0×目镜，其视野直径要求为0.016），计数100个视野内的细胞数，然后用下式计算：SCC=100xN／Лr2 　　视野