第03章酶催化作用机制.pptVIP

稳态：是指ES的生成速度与分解速度相等，即 [ES]恒定。 K1 ([Et]－[ES]) [S]＝K2 [ES] + K3 [ES] K2+K3 ＝ Km （米氏常数） K1 令： 则(2)变为: ([Et]－[ES]) [S] ＝Km [ES] (2) ＝ ([Et]－[ES])[S] K2+K3 [ES] K1 整理得： 代表中间产物的稳定性 当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即[Et]＝[ES]，反应达最大速度 Vmax＝K3[ES]＝K3[Et] (5) [ES]＝─── [Et][S] Km + [S] (3) 整理得: 将(5)代入(4)得米氏方程式： Vmax[S] Km + [S] V＝──── 将(3)代入(1) 得 K3[Et][S] Km + [S] (4) V＝──── 当反应速度为最大反应速度一半时 （1） Km值的数值 ∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 Km＝[S] 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 （2）Km与Vmax的意义 Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。单位与底物浓度一样。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可近似表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 d) 已知Km值情况下，应用米氏方程可计算任意底物浓度时的反应速度，或由所要求的反应速度求出应当加入底物的合理浓度。 实际用途： 1）可由所要求的V求[S]； 练习题：求反应速度达最大反应速度99%时的底物浓度？（用Km表示） 2）根据已知[S]求该反应V。 练习题：已知某酶的Km值为0.05mol/L，要使此酶所催化的反应速度达到最大反应速度的80％时底物的浓度应为多少？ Vmax（Vm） 定义：Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。 意义：Vmax=K3 [E] 如果酶的总浓度已知，可从Vm计算 动力学常数K3。 （3）Ｋm值与Ｖmax值的测定基本原则：将米氏方程变化成相当于y=ax+b的直线方程，再用作图法求出Km。 1） 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 两边同取倒数 Vmax V [S] Km Vmax/2 酶动力学的双倒数图线 2） Hanes作图法 [S] [S]/V -Km Km/Vm 在林－贝氏方程基础上，两边同乘[S] [S]/V=Km/Vmax + [S]/Vmax Eadie-Hofstee plot Hanes plot Cornish-Bowden plot Dixon plot 定义 — 当酶被底物充分饱和时，单位时间内（每秒钟）每个酶分子催化底物转变为产物的分子数（微摩尔数）。 意义 — 可用来比较每单位酶的催化能力。 酶的转换数 （二）酶浓度的影响 在底物浓度足够高的条件下，酶催化反应速度与酶浓度成正比，如图1—3所示。它们之间的关系可以用下列数学式表示： v＝k3[E] （三）? 温度的影响 每一种酶的催化反应都有其有效温度范围和最适温度。在有效温度范围内，酶才能够进行催化反应；在最适温度条件下，酶的催化反应速度达到最大 （四） pH值的影响 酶的催化作用与反应液的pH值有很大关系。每一种酶都有其各自的有效pH值范围和最适pH值。只有在有效pH值范围内，酶才能显示其催化活性，在最适pH值条件下，酶催化反应速度达到最大 （五）抑制剂的影响 能够使酶的催化活性降低或者丧失的物质称为酶的抑制剂。 抑制剂有可逆性抑制剂和不可逆抑制剂之分。 1.不可逆抑制 不可逆抑制剂与酶分子结合后，抑制剂难于除去，酶活性不能恢复。不可逆抑制作用又可以分为非专一性不可逆抑制和专一性不可逆抑制两种。 （1） 非专一性不可逆抑制 非专一性不可逆抑制剂作用于酶分子中一类或几类基团。如果被作用的基团属于必需集团，或者作用后引起酶分子活性中心结构不可逆转的改变，则导致酶的不可逆抑制。不可逆抑制剂主要有：汞、银、铅等重金属离子，有机磷、有机砷、有机汞、氰化物、硫化氢化合物，酰基化试剂，烷基化试剂，巯基乙醇等。 （2） 专一性不可逆抑制 专一性不可逆抑制剂是根据酶的底物结构和催化机制，专门设计的只对