胰甘油三酯脂酶在大鼠两型星形胶质细胞中的表达研讨.pdf

胰甘油三酯脂酶在大鼠两型星形胶质细胞审的表达研究 严美娟牛淑琼孙茂民刘 夏春林木 苏州大学基础医学系纲脆种经擞鞠攀研究懿，汲弥省苏州谬 215123 美键诩l解饿学t胶质绷胞落甄i胰髓i!llI量酗瞻酶；大戳 搬獬“双谱系澎滋”，璺孵胶厩细脆分为l型避形胶鹿细凝(type-l 型履形胶质细麟(啪e．2 彤态和功能。￡均宵整界。我僵]通过麓因潴表达分折发现黼型麓形脞质细魏t智存在霄大量的茇臀 024 比懂均值为79．195Ol，邋商乎2(比值犬乎2即袭苯其程2侧星膨胶硬细胞中的表达明最 商表达．姆l魁爨形胶质细胞栩魄，氛霄显著性攘辨)。两进一步诚裳胰5l{j。油蔓三酾脂酶攥网谯蘸 型避形胶质细胞巾的袭选麓黪。我们通过RT．PCR以及免疫细胞化学技术梭测胰村瀚篓醣滕麟 基阏在两受星形殷藤细胞巾的袤达，为进一步探讨胰汀油篡醢脂黪攮因谯两侧星形艘旗细脆啦 物学幼能打下基础。 l材料和方法 1．1试剂 peprolech 公词)，小鼠抗A285单抗(1：200，R＆D公司)，小暾抗G张垤单抗(1；400)、兔挽GFAP多抗 标记的羊抗兔IgG抗体(1：lOO)购囱Sigma公蠲。 1．2细胞培养 1．2。lo．2A祖细艟培养 新生3d内的SD大霸|【(南通犬学文骏动物中心摊供)取出大腑皮质，吹打成悬液，以3×1矿／ 的蟥漭籀巾培养。lOd时细胞分鞘层，上屡为O．2A组细胞、小胶藤细胞和TlA嶷落，。F层为TlA。 此时通过趟温震辩和整速贴燮的方法分离、纯化0．2A祖绷胞，种植p包被咒L豹蜡养凝中，培 bF(讲。 滚为：D酗E：隧，F-12、2％B27、long≯mlPD(垮、10n∥ml 112。2 TlA培养 TlA。 1．2．3 T2A培养 d。分化为T2A。 0—2A祖细胞在DMEM+15％FCS+lOn∥妇缸pDGF培液中墙葬3 1．3引物设计和RT-pCR 1．3．1引物设计 瓣基因。￡游弓I物5’．GAGATTTCTCTG互ATGGCACA．3’：’下游留f物 339却n L3．2总RNA制备 分别收榘TlA釉T2A纲胞，翊强zoI漱抽提褥剥总RNA。甲醛变性艘电泳检测葳完整性。聚 用紫外分光光度计．测定OD260及OD280僖．计葬RNA总禽壤。 l-3．3逆转录反应 2 穰O．5札Eppen如心管，加入总RNA bu羝r H20歪 2姐．5脚∞儿渊口mix2此。 加入逆转最酶l皿(4U)，加入DEPC一捏eated h。93℃5 20虹，轻混匀，稍离心，黢37℃1 min灭滔酶。产物一20℃绦存备用。 1．3．4 PCR扩增 lOmmol兄)l 蕉冰，E依次蚋入，IO×pCRbll￡fef2．5江。，dN硬mix(each ll王．，SSeCKS。E下 lU，加入双燕永拦总体积为 游引物Pl、P2(10岬吩杉L)各l屿．cDNA2I_|L，Taqpolym盯ase 25¨_L。轻轻混匀，稍蕊。瞄，预热热循环仪毯80℃，将PCR扩增管迅速移至热龋环仪上，执行 min。 mj_n，94℃_45s，57℃45s，72℃45s．循环31次腐斑72℃惩伸7 以F霹序：94℃颡变性3 1．O％球脂糖凝股电泳检测PeR产物。 1．4免疫荧光细胞化学 PBS洗涤艨．4％多聚甲隧爨温固定15mi