难治性癫痫大鼠海马MRP1的表达及药物影响的研究(1).pdfVIP

2 致谢……………………………………………………………51 3 托吡酯在癫痫治疗中的研究进展(综述) 射马桑内酯1IIll／(kg·84h)，制备难治性癫痫大鼠模型，出现癫痫发作后 按Racine分级判定，根据惊厥程度将行为表现分五级，I级：咀嚼运动； II级：颈部肌肉抽搐；III级：一侧前肢阵挛；Ⅳ级：站立并双前肢阵 挛；V级：四肢抽搐，失去平衡跌倒。ⅡI级以上为成功制作点燃模型。 模型组大鼠点燃后，继续注射马桑内酯1m1／(埏·168h)四次。联合组大 鼠点燃后，托吡酯200m∥(kg·d)和丙磺舒loom∥(kg·d)灌胃30天，继 续注射马桑内酯1m1／(kg·168h)四次。妥泰组大鼠点燃后，给予托吡 大鼠注射生理盐水llIll／l(g四次，生理盐水2“灌胃30天。．四组均以4％ 多聚甲醛灌注固定后取脑，常规石蜡包埋切片(片厚4岬)，分别进 于大脑海马CA3区血管周围，采用AX07TIU．A显微成像系统，关闭 自动白平衡功能并保持相同的光源、光学条件。同一区域内随机照5 6．O(IPP6．0)图像分析软件分析，测得每张照 张片，用ImagePro．Plus 片中MI冲l阳性细胞数和积分光密度，同理，测得海马CA3区GFAP 的阳性细胞数和积分光密度，取各指标平均值为一例标本的代表值。 对所得数据进行统计学分析。结果：1．H．E染色：对照组太鼠海马CA3 ’ ： ．弓’‘ + ● ● 区神经元呈带状分布，数量较多，排列较整齐，细胞形态完整，细胞 外组织间隙正常。CA3区锥体细胞体积较大，核大而圆，位于细胞中 央，染为淡蓝色：核仁，核膜清晰；胞质均匀，尼氏体呈密集分布的 细小颗粒状；部分细胞突起可见。模型组大鼠海马CA3区细胞仍呈带 状分布，但排列紊乱，形态改变；细胞排列稀疏，细胞丢失明显；残 存细胞体积变小，胞体收缩呈多角形或极不规则，胞浆浓缩，染为深 蓝色，核固缩深染，结构不清，部分细胞可见缩短深染的突起；细胞 及血管周围间隙增大。两治疗组海马CA3区神经元数目比模型组多， 细胞形态比模型组规则。2．胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化 染色；模型组大鼠双侧海马回和颞叶皮层，均可见GFAP免疫反应 阳性的星形胶质细胞。胞浆呈棕褐色，细胞形如蜘蛛，周围有放射 状突起，有的突起粗短，无分支；有的突起细长，有多极细小分支。 可见细胞水肿，表现为胞体增大，胞浆淡染，胞核染色深，有的内 有空泡。模型组海马回和颞叶皮层GFAP免疫反应阳性的胶质细胞 比对照组胶质细胞突起及其分支增多、GFAP免疫反应性增强。妥 免疫反应性减弱，两治疗组间表达GFAP星形胶质细胞的数目和积分 光密度无统计学差异。3．多药耐药相关蛋白1(MRPl)免疫组化染色： 对照组，仅见部分血管内皮细胞有表达。模型组，海马区血管内皮细 胞染色加深，部分血管周围出现胞浆呈棕褐色的星形胶质细胞。妥 泰组和联合组海马区的血管内皮细胞染色加深，部分血管周围出现胞 浆呈棕褐色的细胞，数量和积分光密度与模型组无统计学差异。结 ’ 二2一‘ ’一 ．_ 论：1．马桑内酯肌肉多次注射引起的难治性癫痫可致神经细胞损伤， GFAP表达增强，MI冲1有所表达。2．在难治性癫痫大鼠模型中，托吡 酯以及托吡酯和丙磺舒联合治疗可以对海马神经元起保护作用，可以 使G殚心表达减弱，两治疗组间表达GFAP星形胶质细胞的数目和积分 光密度无统计学差异。3．妥泰组，联合组和模型组三组，表达MRPl 的星形胶质细胞的数目和积分光密度无统计学差异。 关键词：难治性癫痫；多药耐药相关蛋白1；托吡酯；丙磺舒 ofMl冲1