Angiopoietin1基因修饰的骨髓间充质干细胞MSC的蛋白质组学方法分析.pdfVIP

第26卷增刊 分析测试学报 V01．26 2007年9月 FENXICESHI ofInstrumental XUEBAO(JournalAnalysis) Sep．2007 干细胞(MSC)的蛋白质组学方法分析 钟丽君1，孙丽杰2，杨彬1，刘 丹1，娄雅欣1， 彭嘉柔1，陈凤荣2，崔呜2 统作用于血管生成的晚期阶段，诱导和维持内皮细胞迁移、存活，在血管新生及其稳定的过程中起了 皮细胞凋亡、募集血管周围细胞，维持血管稳定性及参与血管再造。成体组织中Angl广泛分布于肌 肉、前列腺、卵巢、子宫等富含血管的组织中，而无血管或少血管组织中Angl存在量较少拉j。腺病毒 小梗死面积，增加室壁厚度，改善心肌重构”J。本研究的目的是用蛋白质组学技术寻找与Angl相关的 差异表达的蛋白质，通过凝胶图像分析和统计学分析，确定与Angl相关的差异蛋白质斑点，用电喷雾 电离串联质谱技术，鉴定差异蛋白。希望能为深入研究Angl的作用机制提供新的线索。 1 实验部分 1．1试剂与材料 学第三临床医院心内科提供MSCAngl细胞和MSC细胞。 1．2实验仪器与软件 PROTEANIEF lIXi Master Cell等电聚焦电泳仪，PROTEANCell垂直板电泳仪，分析软件Imaging 2DElite TofUhima Global质谱仪。 1．3细胞蛋白提取 按每1×10 mmol／L 7个细胞加入150斗L裂解液(7mol／L尿素，2mol／L硫脲，40g／LCHAPS，65 500 DTF，2Bio—Lyte，蛋白酶抑制剂)，超声破碎细胞3S，间隔2S，重复10次，冰浴20min，17 g／L r／min，4。C离心60 1．4双向电泳 moV 固相pH梯度等电聚焦凝胶电泳：将100斗g(银染)或1mg(考染)细胞蛋白样品与上样缓冲液(7 mmol／L CHAPS，65DTF，2 L尿素，2mol／L硫脲，40∥L g／L 为300止，加人聚焦盘中，放入17cm，pH3～10的IPG胶条。水化和等电聚焦按设置的程序进行，即 000 V12 V30 V1 V5 被动水化1h，主动水化50 h，除盐250 min、1 h，升压10000h。等电聚焦后的IPG mol／L 胶条在平衡缓冲液I(6mol／L尿素，20g／LSDS，0．375Tris—HCI，pH8．8，20％甘油，20g／LDTY) mol／L 中平衡10min，然后在胶条平衡缓冲液II(6mol／L尿素，20g／LSDS，0．375 Tris—HCI，pH8．8， 基金项目：国家自然科学基金资助项目 ．--——47．—-—— 第26卷 分析测试学报