靶向性长波激发双波长胞浆Ca2荧光探针STDIn.pdfVIP

第20卷增刊 分析试验室 Vol.20.Suppl 2001年 it月 ChineseJournalofAnalysisLaborntory 2001-11 靶向性长波激发双波长胞浆Cat`荧光探针STDIn 张小玲，’，阎宏涛2 。.陕西师范大学化学与材料科学学院.西安710062;2.西北大学化学系，西安710069) 摘 要:研究了新型细胞Ca荧光探针STDIn的分析.性能，并采用激光扫描共柔焦技术比校研充了STDIn与FIuo-3汁胃 底平汾肚细胞 HL-60细胞、心肌加胞子的标记及其汁袍内游离C犷浓度变化的响应等待性.结果表明，该试封哭光激 发波长位于可见光区、与Ca姑合前后吸收和灸光峰位移且试别进入细胞后只标记胞装而不标记胞核，足目前唯一的可以 AM的型无拐伤导入细胞、双波长、可见光激发的真正胞装CaAIif,4.示*.].另外，相对于Fluo-3,STDIn对胞M[Cal, 快速交化的响应更迅速更灵歌，且在胞装内较Fluo-3等亦更易于负载. 关锐词:新型iff胞Ca荧光探针;STDIn;犯向性;长波激发;x波长t1率法 胞内游离钙(Ca2,)具有重要的生物学功能，其 Fluo-3虽激发波长位于可见区，避免了第一、二 作为细胞内重要的生理应答反应信使，参与调控 代试剂需在紫外区激发而引起的细胞自身荧光的 众多的生命过程。且胞内Ca+的运动具有时间、空 千扰和对细胞的光损伤等不良影响，但与Ca结合 间和振幅特异性。因此实时准确地测定胞质游离 前后却无荧光峰的位移，故而不能采用双波长比 钙的含量、分布及其聚散涨落的变化，在生理、 率法，大大地限制了其在胞内游离c扩绝对浓度定 病理和药理学上均具有十分重要的意义。然而， t测定中的应用扩同时，细胞荧光图像分析表明， 由于细胞特定的生理条件限制以及对胞内离子侧 以上试剂的共F4*足捧补它们进入细胞后 定的较高要求，使得现有的许多分析方法在此方 不仅进入胞桨扩祠时汪进补步进入胞核，即有明 面的应用受到一定的限制.而钙荣光指示剂法则 显的分室化效应.这少赞卿到的Ca-M号“ 由于试剂可以AM醋型无报伤导入细助，同时借助 份箱号.,祠时也会包含有胞核 一 不再单纯为AF条 先进的荧光图像分选技术可实时、快速地提供细 Ca信号，有可能给真正胞浆Ca十信号的响应带来 胞内钙离子时空分布的二维乃至三维图像等而在 影响，特别是对于细胞群体的分析。而大多数情 近年来得到迅速发展。该方法的发展很大程度上 形下，人们真正意欲得到的是胞浆Ca信号的变 取决于试剂性能的优劣. 化。继Tsien之后虽又有数种改进的钙荧光试剂 目前被广泛采用的胞质游离钙侧定的荧光试 的报道，但仅限于对其光谱学性能的优化电一「”，而 剂主要是由Tsien等人自1980年以来所合成的 对分室化效应似无大的改进。人们也曾在现有钙 三“代”试剂II-a1。其中又以第二代试剂Fura-2 荧光试剂的分子中连接多枯制成多锗藕合物以克 和第三代试剂Fluo一应用最为广泛.Fura-2与 服分室化效应.但连接多撼之后的钙试剂却不再 Ca结合前后有荧光峰的位移。可采用双波长比率 能以s酣型的形式无胡伤导入细胞，而须采用微 法进行侧定，但激发波长太短，豁在紫外区激发: 注射、膜片钳等技术，给应用带来诸多不便和不 第20卷增刊 分析试验室 Vo1.20.Supp1 2001年Il月 ChineseJournalofAnalysisLaboratory 2001-11 良影响。因此，合成只进入胞浆而不进入胞核、 (2)同时激光共聚焦细胞荧光图像分析显示， 且可长波激发、同时与Ca结合前后有吸收和荧光 STDIn具有靶向性，经STDIn-AM标记后的胃底 峰位移的整体性能优良的钙荧光试剂是十分必要 平滑肌细胞、HL-60细胞、心肌细胞等细胞周