转铁蛋白介导的脑靶向基因传释系统的研究.pdfVIP

Int JPharm，2003，258：55． [9]Linden S．Invitroreleaseoftimololmaleatefromaninsitu JPhann，1993，95：219． K，Engstro’m gellingpolymersystem[J]．Int Kumar of VitroandIn Evaluation 【10]BahsubramaniamJ，Thihk M，PanditJ．K．Gellan—BasedSeleral Indomethacin：InVivo Implants [J]．DnIgDel，2004，11：371． 转铁蛋白介导的脑靶向基因传释系统的研究 黄容琴蒋晨裴元英 复旦大学药学院药剂教研室 (上海200032) 关键词转铁蛋白；聚乙二醇；树突状分枝物；脑靶向；基因载体 nervou8 血脑屏障(blood—brainbarrier，BBB)可有效保护中枢神经系统(central system，CNS)免受有害物质的侵袭【l】。然而，98％ 的脑疾病治疗药物由于BBB的存在无法进入NS[2l。基因治疗是有潜力的治疗手段，但现存的基因载体静脉注射难以跨越BBB， 目前主要采用开颅术或脑实质直接定位注射的方式【301。这些方式伤害大且难以将外源基因运送到脑的广泛范围。脑基因靶向 技术可以通过静脉注射的方式使外源性基因在CNS广泛表达【51。研究表明，BBB上存在某些特异性受体，如转铁蛋白 (n鲫蛐，吖)受体和胰岛素受体等【6】。11f受体因其在毛细血管上的表达仅限于脑毛细血管内皮而备受关注[7】。另外，树突状 与带负电的DNA通过静电作用结合[8】。本实验通过具有双功能基团的亲水性高分子聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)连接 PAMAM和Tf，合成新型脑靶向基因载体，考察其细胞摄取性质和体内脑靶向能力。 1材料与方法 1．1主要仪器和试剂 Plus 2401PC紫外可见分光广度仪(岛津公司，日本)；Mercury 白质粒pEGFP—N2(Clontech公司，美国)；荧光素酶质粒pOL2一Control Plasmid 国)；QIAGENMegaKit(Qiagen 5，5 一Dithiobis(2一nitrobenzoie salt ester，80dlum acid，suffosu贮einimidyl (MolecularProbes公司，Eugene，OR，美国)o 1．2细胞培养 青霉素，100mg／L链霉素，2mmol／L谷氨酰胺，100ms／L 包被培养瓶中，接种密度为1xIo个细胞／co。在5％(体积分数)c02、37。C培养箱中培养三天，达到80％融合时可用于实验。 1．3 PAMAM—PEG一If的合成 100mM BODIPY，制得BODIPY—PAMAM(BP)。再与NHS—PEG—MAL(PEG)溶液(溶于pH 1．4 PAMAM—PEG一If的结构鉴定 PIT冻干后 溶于D20进行核磁共振波谱分析。 1．5荧光显微镜和流式细胞