多壁碳纳米管构建药物传递系统对临床耐药菌的抑制和逆转耐药作用研究.docVIP

精品论文 参考文献 多壁碳纳米管构建药物传递系统对临床耐药菌的抑制和逆转耐药作用研究 李頔 魏来 匡扶 冉娅娟 王娜 韦娜 刘蕊 赵春景 钱妍 (重庆医科大学附属第二医院药学部 400010) 【摘要】目的 研究多壁碳纳米管(MWCNTs)构建药物传递系统对耐药菌抑制和逆转耐药作用。方法 制备MWCNTs-帕珠沙星药物传递系统，研究生物相容性和对耐药大肠埃希菌抑制能力和相互作用。结果 MWCNTs生物毒性较低，能显著增强亚MIC帕珠沙星对耐药菌抑制能力。结论 MWCNTs构建的新型药物传递系统可能通过靶向运输作用增强抗菌药物对耐药菌的抑制活性并逆转耐药。 【关键词】多壁碳纳米管 药物传递系统 抗菌活性 逆转耐药 【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）07-0152-01 耐药菌的产生成为临床化疗失败主要原因之一，对患者身体健康造成严重威胁[1]。新型纳米材料碳纳米管(CNTs)除有易化学修饰和生物相容性好等优点外还能增强药物对酶耐受性及靶向运输[2,3]。本文利用MWCNTs为载体构建帕珠沙星药物传递系统，对该系统抑制耐药菌作用进行研究。 1.材料与仪器 大肠埃希菌标准菌株(编号25922)和耐药菌株由重庆医科大学附属第二医院检验科提供；MWCNTs购自成都有机化工有限公司，纯度大于95wt%，长度约50mu;m；帕珠沙星标准品由中国食品药品检定研究院提供(批号130460-200701)；SpectraMax M2e型酶标仪(Molecular Devices)；高效液相色谱(HPLC)仪(Agilent)；S-4800型扫描电镜(Hitachi)。 2. 方法与结果 2.1 药物传递系统制备 MWCNTs亲水性修饰根据文献报道方法制成[4]。之后将MWCNTs 100mu;g/mL和帕珠沙星100mu;g/mL混合于超声浴中反应10 min并离心，上清液过滤备用。帕珠沙星吸HPLC分析色谱条件：流动相：磷酸缓冲溶液:乙腈=30%:70%；固定相：C18；柱温：30℃；流速：1mL/min；检测波长：243nm。帕珠沙星5～100 mu;g/mL浓度范围标准方程为S = 378133c－147087，R=0.9998。测定上清液药物浓度后根据公式q=(c0-ct)V/mMWCNTs计算MWCNTs和帕珠沙星吸附量为46 %。 2.2 药物传递系统抑菌效果研究 制备大肠埃希菌菌液，与系列浓度帕珠沙星共培养，测得MIC为：标准菌株1.0mu;g/mL，耐药菌株32mu;g/mL，以确证耐药菌株耐药性。将耐药菌与系列浓度MWCNTs-帕珠沙星共培养，以MTT法检测细菌活度。如表1所示：MWCNTs在0.55～70mu;g/mL范围内，细菌存活率非常高，证明MWCNTs生物毒性很低；而帕珠沙星浓度在MIC(32mu;g/mL)时，与帕珠沙星和MWCNTs-帕珠沙星共培养的细菌存活率都在10%以下，说明该浓度药物能较好抑制细菌生长；当帕珠沙星浓度在16mu;g/mL时，帕珠沙星组细菌的存活率高于80%，而MWCNTs-帕珠沙星组细菌存活率降到30%以下；而帕珠沙星浓度在8.0mu;g/mL时，MWCNTs-帕珠沙星组中细菌的存活率较帕珠沙星降低30%以上，说明MWCNTs可显著增强药物对耐药菌抑制能力并逆转细菌耐药。 表1 大肠埃希菌与MWCNTs、帕珠沙星及MWCNTs-帕珠沙星作用后存活率 2.3 药物传递系统与大肠埃希菌相互作用 MWCNTs-帕珠沙星与大肠埃希菌共培养后离心，点样于铝箔上，常温下风干，以SEM观测结合情况。如图1所示大肠埃希菌表面结合大量MWCNTs-帕珠沙星，菌体结构遭到破坏。 图1 大肠埃希菌MWCNTs-帕珠沙星复合物共培养后电镜图 3.讨论 MWCNTs与帕珠沙星结构均有带大??pi;电子的六元环，可通过pi;-pi;共轭作用形成MWCNTs-帕珠沙星复合物这一新型药物传递系统。研究结果表明MWCNTs能显著增强药物对耐药菌的抑制能力并逆转细菌耐药。SEM考查发现该复合物可通过MWCNTs与细菌细胞膜高亲和力而大量结合在细菌表面。因此，我们推测MWCNTs可能通过靶向运输、提高药物在细菌内浓度机制实现对抗菌药物的增效。