16章 DNA的生物合成和损伤修复3.ppt

* * * * 二、真核生物的DNA复制 真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等； DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶?/?转换； 切除冈崎片段RNA引物的是核酸酶RNAse HⅠ和FEN1等。 真核生物与原核生物DNA复制的差异： Pol ?负责合成引物 Pol ?负责DNA复制、核苷酸切除修复和碱基切除修复 Pol ? 功能与Pol ?相似 Pol ? 可能和碱基切除修复有关 Pol ? 负责线粒体DNA复制和损伤修复 （一）常见的真核DNA聚合酶： 拓扑异构酶，去除负超螺旋（使解旋酶容易解旋），去除复制叉前方产生的正超螺旋 TolⅠ和TolⅡ DNA双螺旋解链，参与组装引发体 DNA解旋酶 连接冈崎片段 DNA连接酶Ⅰ 核酸酶，切除RNA引物 RNAse HⅠ 核酸酶，切除RNA引物 FEN1 DNA复制，核苷酸切除修复，碱基切除修复 Pol ?/? 合成RNA-DNA引物 Pol ?/引发酶 有依赖DNA的ATPase活性，结合于引物-模板链，激活DNA聚合酶， 促使PCNA结合于引物-模板链 RFC 激活DNA聚合酶和RFC的ATPase活性 PCNA 单链DNA结合蛋白，激活DNA聚合酶，使解旋酶容易结合DNA RPA 功 能 蛋白质 （二）真核DNA复制叉主要蛋白质的功能 Pol ?/引发酶分子含有4个亚基： 1. Pol ?/引发酶复合物合成RNA-DNA引物 p180：催化亚基 p48： 具有引发酶活性 p58： p48的稳定性和活性所必需的 p70： 与组装引发体有关 功能：合成RNA-DNA引物（复合引物） 2.复制蛋白A（replication protein A，RPA） 结合单链DNA（与原核SSB功能相似） 促使双螺旋DNA解旋 激活Pol ?/引发酶活性 为Pol ?依赖复制因子C（RFC）和增殖细胞核抗原（PCNA）合成DNA所必需 RPA三聚体与SV40 T抗原结合，组装引发体复合物所必需 RPA参与DNA重组和修复 3. RFC与E.coli DNA聚合酶Ⅲ的?-复合物功能相似 复制因子C（replication factor C，RFC） 结合PCNA，促使可滑动的DNA夹子—PCNA结合于引物-模板链，是Pol ?在模板DNA链上组装并具有持续合成能力所必需的。 PCNA是Pol ?的进行性因子，使Pol ?获得持续合成能力。 PCNA是协调DNA复制、损伤修复、表观遗传和细胞周期调控的核心因子。 PCNA水平是检测细胞增殖的重要指标。 PCNA能激活Pol ?。 4. PCNA是可滑动的DNA夹子 增殖细胞核抗原 （proliferating cell nuclear antigen，PCNA） 结构： 功能： 同源三聚体，可形成闭合环形的可滑动DNA夹子。 p125：催化亚基，具有DNA聚合酶活性和3??5?核酸外切酶活性，其N端区与PCNA相互作用 p50：辅助PCNA激活p125 5. DNA聚合酶?合成前导链和后随链 结构：Pol ?分子是异源二聚体（p125和p50） 功能：Pol ?合成前导链和后随链 DNA聚合酶? FEN1（flap endonuclease 1）具有核酸内切酶和5??3?核酸外切酶活性，参与去除冈崎片段5?端的RNA引物。 6. FEN1和RNAse HⅠ切除RNA引物 RNAse HⅠ是核酸内切酶，参与冈崎片段成熟时切除5?端RNA引物，底物RNA连接在DNA链的5?端，切割后在DNA链的5?端残留一个核糖核苷酸，这个核苷酸再被FEN1切除。 DNA复制需要DNA解旋酶打开DNA双螺旋，使复制模板链得以暴露。 7. DNA解旋酶打开双螺旋以暴露复制模板 真核DNA复制叉模型 Pol ?/引发酶 合成RNA-DNA引物 Pol ? 合成前导链和后随链 RFC 识别引物iDNA的3?端并驱除Pol ?/引发酶 PCNA 结合DNA并引入Pol ? RNAse H I/FEN1 切除冈崎片段5?端的RNA引物 真核生物复制过程中酶及功能 Pol ?（或Pol ?） 填补冈崎片段之间的空隙 DNA连接酶Ⅰ 封口 RPA 稳定解旋后的单链DNA 解旋酶 复制叉的形成和移动必不可少 拓扑异构酶 释放复制叉前进时产生的扭曲应力 (三) 延伸时发生DNA聚合酶?/?转换 识别染色体DNA复制起点和DNA局部解旋后，Pol ?/引发酶复合物结合于复制起点，这一步叫做引发体组装。 引发体组装包括DNA