呼吸道感染常见病原菌.pptVIP

微生物检验 标本采集 根据感染部位不同采集标本，如鼻咽试 子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥， 及时送检。 检验程序 血液、脑脊液 脑脊液、鼻咽试子、痰、脓液 增菌培养 分离培养 巧克力琼脂 血液琼脂 直接涂片染色 革兰阴性小杆菌多形性 初报 挑选可疑菌落 鉴定 分型 菌落特征 菌体形态 卫星试验 X、V因子需求试验 报告 吲哚 、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶（生物分型） 荚膜肿胀试验（荚膜多糖抗原分型） 35℃ 图 流感嗜血杆菌的检验程序 35℃ 5~10%CO2 检验方法 （1）直接镜检：痰液、脓液、鼻咽分泌 物等标本可直接涂片，脑脊液离心取沉 淀物涂片，革兰染色镜检。如查见革兰 阴性短小杆菌，呈多形性，结合临床症 状，作初步诊断。 （2）分离培养： 将血液、脑脊液增菌培养后，转种巧克力琼脂和血琼脂培养基，其他标本可直接划线接种于巧克力琼脂和血琼脂培养基，经35℃培养18～24h，根据菌落特征、菌体形态、溶血情况、卫星试验、X和V因子需求试验定种，再作生化试验和荚膜肿胀试验分型。 卫星试验： 挑取可疑菌落，密集划线接种于兔血琼脂平板和M.H琼脂平板上，再将金黄色葡萄球菌点种于培养基上，35℃，培养18～24h，如见金黄色葡萄球菌周围菌落较大，而远处菌落较小，即卫星试验阳性。 （3）鉴定要点： 本菌为革兰阴性短小杆菌，呈球杆状，逗点状，丝状等多形态性； 在巧克力琼脂平板上为灰白色，中等大小、湿润的菌落； 流感嗜血杆菌血平板卫星试验阳性，M-H琼脂平板卫星试验阴性； 以X、V和X+V因子纸片贴于接种细菌的M-H琼脂平板上，仅在X+V因子周围生长为流感嗜血杆菌。 荚膜肿胀试验： 取一定浓度菌悬液，滴于载玻片上，再依次滴加a～f流感嗜血杆菌抗血清混匀，加少量美蓝液混和后覆盖片，室温10min后，用油镜观察，如查见菌体呈蓝色，周围绕有界限分明未染色的膨大空白圈为阳性。此法可直接检查标本中细菌，作早期诊断 药敏试验： 选用专用培养基 HTM（Haemophilus Test Medium Base） 标准菌株： ATCC 49247 ATCC 10211 社区获得性呼吸道感染的病原学 社区获得性呼吸道感染常见病原菌 其他致病菌包括：卡它莫拉菌、GNB、衣原体等 Adapted from Woodhead M.J Antimicrob Chemother .1994:34(suppl A):85-92 以色列CAP的病因调查(1991-92: 346例) 阳性％ Thorax 1999;51:179 以色列不同年龄组CAP的病因调查 第一位 第二位 17－44岁 肺炎支原体 肺炎链球菌 45－54岁 肺炎链球菌 肺炎支原体 55岁 肺炎链球菌 肺炎衣原体 CAP病原学诊断 我国苛养菌分离现状 未建立标本送检指南； 送检标本与接种时间相隔太长； 不具备苛养菌分离的培养基； 无CO2培养环境； 不能辨别菌落； 无鉴别试剂 苛养菌分离率低，污染菌影响药敏结果， 迄今国内无可信的CAP病原学流行病学资料。 CAP病原学诊断 标本采集 咽试子应用无菌湿棉签取，即时送检。 实验室应即时接种血琼脂和巧克力琼脂（含抗菌素）， 置5-10％CO2气体环境。 标本质量评价 直接涂片镜检： 鳞状上皮细胞10/低倍视野 白细胞25/低倍视野 鳞状上皮细胞：白细胞1：2.5 细胞学筛选标本的必要性 细胞学筛选标本的必要性 标本处理 痰标本用无菌盐水约20ML漂洗2次 用等量sputosol 作用20分钟，溶解粘痰 用四区划线法分别接种血平板、巧克力平板和麦康凯平板 放置CO2培养箱孵育 从采集标本到接种平板应短于2小时 报告方式 痰培养以半定量形式记录菌量，即1+、2+、3+、4+ 未发现致病菌生长时，培养48小时出报告，以免部分致病菌漏检 半定量培养结果的临床意义 半定量 （致病菌或条件致病菌浓度） 相对定量 (CFU/ml ) ? ? 临床意义 + ≤104± 多为污染菌 ++ ≈105 污染菌可能性大，重复培养 1+：污染菌