第10章 紫外新2.ppt

第十章 紫外－可见分光光度法ultraviolet and visible spectrophotometry; UV-vis;一、Lamber-Beer定律 吸收光谱法基本定律，描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待 测物浓度的关系 假设一束平行单色光通过一个吸光物体 ;取物体中一极薄层 ; 吸收度与浓度成简单正比关系 透光率与浓度成指数函数关系 浓度增大一倍，吸收度增大一倍，透光率从T降至T2 ;吸光系数的物理意义 在一定波长处，单位浓度、单位厚度的吸光度。 在给定单色光、溶剂和温度等条件下，E是物质的特 性常数。 1. E=f（λ） 当组分性质、温度和溶剂一定，E=f（λ），表明物质 对某一特定波长光的吸收能力。 2. 不同物质在同一波长下E 可能不同（选择性吸收），同 一物质在不同波长下E一定不同 3. E↑，物质对光吸收能力↑, 定量测定灵敏度↑， → 定性、定量依据 ;例： 氯霉素（M=323.15）的水溶液在278nm处有吸收峰。用 纯品配成100ml含2.00mg的溶液，用1cm吸收池,在278nm 测得T=24.3％，则 ;Lamber-Beer定律的适用条件 单色光 稀溶液 适用于透明均质固体、液体和气体样品 适用于可见光、紫外线和红外线 如溶液中同时存在两种或两种以上吸光物质，只要不互相影响性质，各组分吸光度具有加和性 应用：多组分测定 ;二、 偏离Beer定律的因素 依据Beer定律，A与C关系应为经过原点的直线 偏离Beer定律的主要因素 （一）化学因素 （二）光学因素 ;（一）化学因素 Beer定律适用于稀溶液，浓度过高会使C与A关系偏离定律， 因高浓度 时，相互作用增大，浓度越大，偏离越大。浓度改变，引起离解、缔合、 与溶剂间的作用等原因发生平衡移动，使物质的吸收系数不能保持恒定， 导致偏离。 例：亚甲兰阳离子水溶液的吸收光谱 单体的吸收峰在660nm，二聚体的吸收峰在610nm，随着浓度的增大， 660nm吸收峰减弱，而610nm吸收峰增强，吸收光谱的形状改变。 ;又如：重铬酸钾水溶液 ;（二）光学因素 1．非单色光 Beer定律应用前提—单色光，但真正的单色光难以得到。 照射物质的光是经单色器（狭缝)从连续光谱中分离出来的光， 包含所需波长在内一定波长范围的光。 这一宽度称谱带宽度S，常用半峰宽表示。 ;S越小，单色性越好。但仍是复合光，可使吸光度变值而偏离定律。主要原因是物质对不同波长的光有不同的E。以简单情况定性说明：;讨论： 假如λ1是所需光的波长，则λ2产生的影响是： E1＜E2时，吸收度增大，正偏差 E1＞E2时，吸收度降低，负偏差 结论： （1）选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑） （2）选λmax作为测定波长（ΔE↓） ;2．杂散光 杂散光是一些不在谱带宽度范围内，与所需波长相距较远的光。 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染等 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值（特别是在透射光很弱的情况 下，作用明显） 使Ａ变小，产生负偏离 若样品吸收杂散光比吸收照射光更强烈，使A变大，产生正偏离 ;3．散射光和反射光 吸光质点对入射光有散射作用，入射光在吸收池内外界面之间通过时又有反射作用。反射光和散射光均是入射光谱带宽度内的光，直接对T产生影响。 散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形 注：一般可用空白对比校正消除 4．非平行光 使光程↑，A↑，吸收光谱变形;（三）透光率测量误差——ΔT ΔT 是测量中的随机误差，来自仪器噪音。 一类为暗噪音（与光讯号无关） 二类为讯号（散粒）噪音（随光讯号强弱而变化） 测定结果的相对误差与ΔT 的关系推导： 此式表明：测定结果的浓度相对误差取决于两个因素： T和ΔT ;1.暗噪音——与检测器和放大电路不确切性有关 与光讯号无关 ;2. 讯号噪音——与光讯