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·658·
基础研究·
RNA干扰载体的构建及其对293T
人胸腺素p4
细胞目的基因表达的影响+
黄似建 刘 畅 秦泽莲” 陈 莉
(北京大学第三医院成形外科，北京100191)
【摘要】
TMSB4
mRNA和蛋白表达，为进一步研究TMSIM基因的功能提供基础。方法 设计特异性干扰人TMSB4基因的小发卡
I和EcoB
BNA序列，合成含有干扰序列的双链DNAoligo，与经Age I双酶切后的pGCSIL—GFP载体连接产生慢病毒载体。
生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。将获得的慢病毒感染293T细胞，分别采用实时定量PCR和免疫细胞化学染色方法观察
TMSB4mRNA和蛋白的表达情况，利用生成的TMSB4shRNA慢病毒感染原代成纤维细胞。结果 感染重组慢病毒的293T
4-0．1I和1．00
细胞与空病毒转染阴性对照细胞的TMSB4mRNA表达分别为0．56
4-0．007比阴性对照组细胞0．093
为44％。实验组TMSB4蛋白表达水平0。042
0．001)。感染重组慢病毒的原代培养的成纤维细胞与空病毒转染的对照细胞相比，TMSB4蛋白表达水平亦明显降低。
其目的基因蛋白减少，为进一步研究TMSB4基因的功能奠定研究基础。
【关键词】Thymosin即；293T细胞；RNA干扰；慢病毒
中图分类号：R一33 文献标识：A 文章编号：1009—6604(2009)07—0658—05
Constructionof LentlvirusandItsEffects0111the of in293TCeils S访口n，
Thymosln陋Shrna ExpressionThymoslnp4 Huang
Liu Plastic 100191，China
Chang，QinZelian，eta1．Departmentof Surgery，PekingUniversity孤imHospital，Be讲ng
forhuman totestthemRNA
Toconstructarecombinantlentiviralvector
【Abstract】0bjectlve thymosinp4(TMSIM)and
MethodsWe a
and ofTMSIMin293Tcellsafter infectedshRNAlentivirus．
proteinexpression being by designedspecificsequence
both antisenseDNAofthe
ofsmallhairRNA TMSB4 DNA senseand targeting
targeting gene；thecomplementarycontaining oligo
convenedintothe DH5a
WaSclonedintothe vectortoconstructa1entiviralvector．Thev
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