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人组织因子基因RNA 干扰载体的构建与鉴定
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唐 雯 熊石龙 杨红玲 包 杰 杜 江 花少栋 孙学刚 封志纯 南方医科大学珠江医院儿科 广东广
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州510282 南方医科大学 南方医院检验医学中心 中医药学院中医症候实验室 广东广州510515 北京八
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一儿童医院 北京 100700
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摘要 目的 构建人组织因子基因RNA 干扰载体 为达到阻止凝血过程的启动打下基础 方法 利用Invitrogen 公司在
! , O
线软件设计人组织因子基因 NM_001993 干扰片段 合成 shRNA 序列 再制备双链寡核苷酸 ds oligo 退火后形成的
O O , , O O,
ds oligo 双链克隆到pENTRTM/U6 载体的粘性末端 连接产物转化到感受态细胞 增菌 质粒DNA 小提 测序 将构建
, , , ~ 0
的载体转染到脐静脉内皮细胞, 应用RT-PCR 和免疫荧光验证载体对目的基因的干扰情况 结果 测序证实阳性克隆为
O
pENTRTM/U6-TF-shRNA 转染到脐静脉内皮细胞后组织因子的表达受到明显抑制 结论 成功构建出凝血途径的人组
, O
织因子基因RNA 干扰载体 为研究组织因子基因RNA 干扰载体在凝血疾病中的应用提供了稳定的转染细胞载体
, O
关键词 组织因子基因 RNA 干扰载体 内皮细胞
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中图分类号 R373.5!!!!!!!!文献标识码 A!!!!!!!!文章编号 1673-4254 2007 07-1000-04
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Construction and identification of RNA interference Vector for human tissue factor gene
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