蛋白质一级结构测序-1.pptVIP

蛋白质一级结构测定一般步骤：;蛋白质测定的详细步骤;B.多肽链的拆分。 由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。 ;B.多肽链的拆分。 几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基). ;C.二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇(还原法)处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂（ICH2COOH）保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。 ; ;S; D.分析多肽链的N-末端和C-末端。 多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸。 在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。 ; D.分析多肽链的N-末端和C-末端。 常用于N－末端的测定方法： 1. DNFP法（桑格反应） 2. PITC法（艾德曼反应） 3. 氨肽酶法（专一性的从氨基末端将肽键切断） 常用于C－末端测定方法： 1. 肼解法 2. 还原法（硼氢化锂） C-末端氨基酸被还原成氨基醇 3. 羧肽酶法（专一性的从羧基末端将肽键切断） ;Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的