微孔板-CCD数码成像胶束增敏荧光法检测氟喹诺酮类药物.pdfVIP

第 3期 杨敬燕等 ：微孔板-CCD数码成像胶束增敏荧光法检测氟喹诺酮类药物 l-2 样 品测试 实验结果表明，当pH值在 2．0～10．0范围内变化 时，4种 FQs类药物均可观察到两种型体发光的现象． 将样品微孔板置于 暗箱样 品台上，在光源激发下 ENR和 OFL在 pH 2．0～5．0范 围内具有较强的荧 样品发出荧光 ，用 CCD数码相机采集微孔板样品荧光 光，pH大于 5．0后，荧光强度逐渐降低 ，但在 pH7．0 并成像，用 ChemlP软件处理荧光数据 ，得荧光亮度与 处呈现一个小的台阶；CIP和 NOR均在 pH 2．0～6．0 其浓度的关系．可进行批量样品的快速检测． 和 pH 6．O～8．0时 出现 2个平台．进一步考察 pH对 ENR荧光激发和发射光谱的影响，发现 pH变化并不 2 结果和讨论 影响其激发光谱的峰形 (图3a)，但 pH8．0时的发射光 谱相对于pH 2．0～6．0时的发射光谱 明显蓝移 (图 2．1 酸度与表面活性剂 的影响 3b)． FQs类药物为天然荧光物质[8](．；【一280～330 阴离子表面活性剂对 FQs类药物 的荧光具有敏 am， =410~430nm)，其分子结构中含有氨基和羧 化作用．0．01mol／LSDS约 3倍增强 ENR的荧光强 基 ，因此，介质 的酸碱性显著影响其荧光光谱特性．配 度．实验还考察了0．Olmol／LSDS共存时pH对FQs 置 300ng／mL、不 同pH (2．0～ 1O．O)的ENR，CIP， 类药物荧光强度的影响，其荧光强度随pH 的变化如 NOR和 OFL溶液 ，以330nm为激发波长 ，考察各 自 图4所示．比较 pH值变化对游离状态和胶束状态 荧光强度随pH 的变化情况 (图2)． FQs类药物发光行为的响应，发现胶束状态 FQs类药 物在更宽的pH范围内稳定发光．实验选择pH4．5的 B-R缓冲溶液控制测定体系的 pH值．进一步考察 SDS浓度对 FQs类药物荧光强度 的影响，结果表明： SDS浓度增加至 8×10 mol／L(SDS胶束临界浓度) 时，4种 FQs类药物的荧光强度均达到最强 ，继续增 加 SDS浓度，荧光强度基本不变．实验选择 SDS浓度 为0．01mol／L． 2．2 数据处理 配置 pH 4．5、SDS浓度为 0．01mol／L、FQs类药 物质量浓度为 5O～500ng／mL的系列溶液 ，分别取 300 L于 96孔微孔板 中，置于暗箱样 品台上，以254