携带猪传染性胃肠炎病毒SN融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定.pdfVIP

1280 畜牧兽医学报2012．43(8)：1273 Acf口、乃￡已ri钾n，．i口e￡Zoo￡Pf^行if以Si”if口 携带猪传染性胃肠炎病毒S／N融合双基因的 减毒沙门氏菌的构建与鉴定 黄小波1，李春松1，杨 恒1’2，曹三杰1，文心田h，廖晓丹，张鑫淼1 (1．四川农业大学动物医学院，动物传染病与基因芯片实验室／动物疫病与人类健康四川省重点实验室， 雅安，625014；2．昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明650224) 摘要：旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)s／N融合双基因的减毒沙门氏菌，并鉴定该疫苗菌株的生物 TGEV的S基因(含主要抗原位点，2．1kb)和N基因(1．2kb)，将s基因和N基因插入pVAxl载体，构建携带s／ 的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定。结果表明，真核质粒pVAx—s／N构建成功．该质粒转染COS7中能 表达2个目的蛋白，重组菌sL7207(pVAx—s／N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好，口服接种小鼠3d可从回肠组 9 织检测到目的基因的转录，以O．5×109、1×109和2×10cFU口服对小鼠均具有安全性，重组菌在接种小鼠的肝、 脾于4周左右逐渐被机体清除。结果表明成功构建TGEV 好的稳定性与安全性等特点，为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。 关键词：减毒沙门氏菌；猪传染性胃肠炎病毒；融合双基因；构建；生物学特性 中图分类号：s852．659．6 文献标识码：A 文章编号：0366—6964(2012)08—1273一08 ConstructionandIdentificationofAttenuatedJSnZmo，leZZn fj，phim“，．f比mHarbouring S／NDoubleFusionGenesofPorcineTransmissibleGastroenteritisVirus HUANG Xia伊b01，LI Chun—son91，YANGHengⅥ，CAOSan_jiel， WENXin_tian”，LIAOXiao-danl，ZHANGXin．mia01 Dis阳sP＆nd Dis已口5P (1．Ln60mfo删。厂A咒im丑Z工挖知c￡io“5Mif加。rmy／KeyLn60m￡o删。厂A咒imnZ 以咒dH“”己盘钉He以Zf^o厂Sif^“an U矗iz肥r5i￡y，Y缸’口，2625014，(玩西2＆；2．CoZZPgPo厂Li／0Scie以cP口扎d’乃c矗以oZogy，K“挖7ni咒g 650224，C矗i，2以) Lki训P，。izyo厂SciP起fP以，zd：陀c^，zoZogy，KM咒7”西29 a newvaccinefororalimmunizationoftransmissible virus Abstract：To provide gastroenteritis doublefusion (TGEV)，attenuated S／N of(TGEV) S＆Zmo扎PZZn￡yp矗i优“ri“mharbouring genes wasconstructedandidentified．TheS kb)andt