携带白细胞介素2和NK4双基因真核共表达质粒的构建及活性观察.pdfVIP

·230· ．论著 携带白细胞介素2和NK4双基因真核 共表达质粒的构建及活性观察 哈小琴 张尚弟 邓芝云 董菊子赵勇 彭俊华 张媛媛林静王鲲 【摘要】 目的构建同时携带白细胞介素2(IL-2)和NK4基因的真核表达载体(pIRES．IL-2．IRES— NK4)，观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景。方法根据Pubmed上公布的IL一2及NK4 mRNA序列，设计 扩增IL-2及NK4 I位点和SalI、 及NK4基因，并将IL一2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES—SEQ的劢o』、MLu Not I位点。获得同时携带IL一2和NK4基因的重组真核表达质粒plRES—IL一2一IRES—NK4。该重组质粒转染 肝癌细胞HepG2后，检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响。结果通过对构建 质粒克隆进行测序及酶切，证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES—IL-2一IRES—NK4构建成功。 用pIRES—IL一2一IRES—NK4转染HepG2细胞后24h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表 达，48h时荧光更强；逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES—IL-2一IRES．NK4质粒细胞的IL一2及NK4基 因表达明显增强。酶联免疫吸附测定检测结果表明，转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋 白表达水平明显增强。转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2．139、1．956mg／L，明显高于未转染组 的0．492、0．620 mg／L。四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES—IL一2．IRES—NK4的细胞表达 上清，有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性，且有剂量效应关系。结论本研究成功构建了同时携带 IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES—IL一2一IRES—NK4，该质粒可有效转染肝癌细胞，且转染细胞表 达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性，提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景。 【关键词】 白细胞介素2；NK4基因；质粒载体；构建；活性 【中图分类号】R378【文献标识码】A Constructionofa vector interleukin-2andNK4 ／／a plasmid containing gene gene Xiaoqin． Kun． ZhangShangdi，DengZhiyun，DongJuzi，ZhaoYong，PengJunhua，ZhangYuanyuan，Lin。尼增，Wang C1inical CommandGeneral sLiberation Departmentof Laboratory。hnzhouMilitary HospitalofPeoplef ArmT；Key Stemce22andGeneMedicineGansu Laboratoryof of Province．Lanzhou730D50．醌ina author：Ho CorrespondingXiaoqin。Email：haxiaoqin2013@163．corn Toconstructarecombinant inteneu— Objective 【Abstract】 plasmid(pIRES—IL一2一IRES—NK4)encoding to i